斗鸡ALV分离株的全基因序列测定及胶体金试纸条与ELISA检测ALV-p27抗原的比较

发布时间：2020-07-16 13:59

【摘要】：禽白血病(avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)所引起的一种传染性禽类肿瘤性疾病。ALV属于反转录病毒科(Retroviridae)α反转录病毒属(Retrovirus)的一类病毒群。鸡只感染ALV后可发生多种肿瘤性疾病,但大多数受感染的鸡只发生亚临床症状,如生长迟缓、免疫抑制或产蛋下降等,给养禽业带来的经济损失是巨大的。近年来,广西凭祥斗鸡养殖业兴起,饲养量较多,但很少有对其进行ALV感染的检测以及病原的研究。因此开展斗鸡的流行病学检测以及代表性分离株的全基因序列测定与分析,对于了解斗鸡的ALV感染状况,丰富和完善各种禽类AL的流行病学资料以及对广西这一特有品种开展净化和防控奠定基础。因缺乏有效的治疗药物和疫苗,目前对于ALV感染的防控主要是通过种群的净化,目前在净化中常采用ELISA方法检测ALV的群特异性抗原P27来淘汰阳性鸡只,但该方法存在检测的操作步骤繁杂、时间长、需要专门的仪器等不足,因此探索一种操作简便、检测时间短,可大规进行模检测而且特异、敏感的方法就成为养殖公司净化工作的急需。课题对凭祥市目前规模最大的一家目前最大规模的斗鸡养殖场的61只斗鸡种鸡采集了其无菌血浆和肛拭子样品,将血浆样品接种于DF-1细胞进行培养,然后分别用ELISA试剂盒检测其细胞培养上清及对应鸡只的肛拭子样品。结果显示,61份病毒细胞培养上清的ALV-p27抗原阳性率为18%(11/61)、肛拭子的阳性率为44.3%(27/61);对其中获得的三个分离毒株GX18PX01、GX18PX02和GX18PX03进行了全基因扩增、序列测定和比较分析,结果显示分离株GX18PX01、GX18PX02的gp85序列与ALV-B参考株的同源性是90.9%,属于B亚群;分离株GX18PX03的gp85序列与ALV-A参考株的同源性是97.1%,属于A亚群;同时,分离株GX18PX01、GX18PX02和GX18PX03的U3区序列均与ALV-J参考株的同源性最高,分别为94.0%、94.4%和96.3%,而与C、D、E、K亚群的同源性则均低于85%。据此推断,三个分离株均属重组病毒,其中GX18PX01、GX18PX02是ALV-B亚群毒株重组了ALV-J的U3序列,而GX18PX03则是ALV-A亚群毒株重组了ALV-J的U3序列。本课题比较了胶体金试纸条与ELISA试剂盒检测ALV-p27抗原的灵敏度和特异性。选取经ELISA试剂盒检测已经知道其S/P值的100份细胞培养上清和100份胎粪样品,平行使用胶体金试纸条进行检测,其中S/P值在0.099及以下的样品10份、S/P值在0.1-0.19间的样品30份、S/P值在0.2-0.29间的样品30份、S/P值在0.3-0.49间的样品20份、S/P值在0.5及以上的样品10份。结果显示,无论是细胞培养上清还是胎粪样品,S/P值在≤0.099和≥0.5的样品(各10份),两种方法的检测结果均一致:前者为阴性、后者为阳性;在细胞培养上清的检测中,S/P值在0.1-0.19、0.2-0.29、0.3-0.49三个区间的样品,胶体金试纸条与ELISA试剂盒检测结果的一致性分别为60%、66.7%和85%;在胎粪的检测中,ELISA试剂盒检测S/P值在0.1-0.19、0.2-0.29、0.3-0.49三个区间的样品,胶体金试纸条与ELISA试剂盒检测结果的一致性分别为46.7%、63.3%和75%。胶体金试纸条检测结果为阳性的样品,ELISA试剂盒检测结果也同样呈阳性。结果表明,胶体金试纸条检测具有很好的特异性,灵敏度低于ELISA试剂盒,但它具有操作简便、检测时间短且不需要专门仪器设备的优点。本课题的研究结果证明,广西凭祥斗鸡存在较高水平的ALV感染,且存在多个亚群的感染,分离的代表性毒株为重组病毒;胶体金试纸条检测ALV-p27抗原的敏感性虽然较低,但是更加适用于现场大规模样品的快速检测。
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.31
【图文】：

的致病性和致瘤性比其他亚群的病毒更强，正是由于ｅｎｖ基因的差异性［４８］。禽白血病的逡逑病毒亚群特异性的ｇｐ８５表面蛋白（ｓｕｒｆａｃｅ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＵ）和ｇｐ３７跨膜蛋白（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ逡逑ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＴＭ）也是由ｅ？ｖ基因编码决定。图１－２展示了病毒粒子结构和组成的模式图。逡逑４逡逑

１．１．４．１病毒的形态逡逑在感染细胞的超薄切片中，通过电镜观察染色后的禽白血病病毒粒子，可以比较清逡逑楚地观察到病毒基本为球形，半径为４５－７２．５ｎｍ邋（图１－３Ａ）。病毒粒子由里到外依次是逡逑位于中央的核芯、中层膜、外层膜以及外膜表面的纤突［１，４９］（图１－３Ｂ）。逡逑图１－３禽白血病病毒粒子逡逑ＡＡＬＶ感染ＣＥＦ超薄切片（李成拍摄）；Ｂ禽白血病病毒粒子形态逡逑Ｆｉｇ．１－３邋Ｖｉｒｉｏｎ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ａｖｉａｎ邋ｌｅｕｋｏｓｉｓ邋ｖｉｒｕｓ逡逑Ａ邋Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ邋ｊ＾Ｌｔｒａｔｈｉｎ邋ｓｌｉｃｅｓ邋ｏｆ邋ＣＥＦ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋ＡＬＶ邋（ｐｈｏｔｏｅｄ邋ｂｙ邋Ｃｈｅｎｇ邋Ｌｉ）邋；邋Ｂ邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ａｖｉａｎ逡逑ｌｅｕｋｏｓｉｓ邋ｖｉｒｕｓ逡逑１．１．４＿２邋ＡＬＶ的理化特性逡逑５逡逑

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本文编号：2758092