鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因的表达和免疫原性研究

发布时间：2020-07-17 14:18

【摘要】：鸡传染性贫血(chicken infectious anemia,CIA)又称蓝翅病、出血性综合征和贫血性皮炎综合征等,是由圆环病毒科鸡传染性贫血病毒(CIAV)引起的以雏鸡再生障碍性贫血和全身性淋巴组织萎缩为主要特征的免疫抑制病。CIAV在MSB1细胞中病毒滴度较低,而通过鸡胚传代获得的病毒量也不高,使CIA灭活疫苗的生产成本很高,难以在养鸡业大量推广应用。CIAV活疫苗由于存在安全风险,也未推广应用。故近年来,基因工程疫苗研制已成为CIAV研究的重点领域之一。为探索制备鸡传染性贫血病毒重组蛋白亚单位疫苗的可行性,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因进行了克隆表达,构建三组重组转移载体:p Fast Bac HTA-VP1及p Fast Bac HTA-VP2;p Fast Bac HTA-VP1-IRES-VP2;p Fast Bac Dual-VP1-VP2,将它们分别转化DH10Bac感受态细胞得到相应的重组表达载体,转染昆虫细胞Sf21获得含有VP1、VP2基因的重组杆状病毒v Bac-VP1、v Bac-VP2、v Bac-VP1-IRES-VP2、v Bac-VP1-VP2,利用三组重组杆状病毒分别感染悬浮培养的Sf21细胞表达重组蛋白,即v Bac-VP1与v Bac-VP2共感染Sf21细胞、v Bac-VP1-IRES-VP2和v Bac-VP1-VP2分别独立感染Sf21细胞。SDS-PAGE及Western-blot结果证明,VP1、VP2基因在昆虫细胞中得到了表达。将重组蛋白制备油乳剂灭活苗免疫SPF鸡进行蛋白免疫原性研究,动物试验进一步证实,重组蛋白免疫SPF鸡可产生高滴度的ELISA抗体,提示重组杆状病毒表达的VP1、VP2蛋白具有良好的免疫原性,其中,v Bac-VP1与v Bac-VP2共感染Sf21细胞和v Bac-VP1-IRES-VP2独立感染Sf21细胞所表达蛋白的免疫效果接近,而v Bac-VP1-VP2感染细胞所表达蛋白的免疫效果最佳。本研究为CIAV亚单位疫苗的开发奠定了良好的基础,具有较好的应用前景。
【学位授予单位】：中国兽医药品监察所
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65
【图文】：

监察所硕士学位论文 而 VP2 是 VP1 的辅助蛋白，能帮助 VP1 形成正确的构象，二者相互协调才护作用[16]。据国内外学者报道，单独表达的 VP1 蛋白抗体反应较弱[17]，共同表有确实的免疫原性[18]。VP3 蛋白被命名为 Apoptin（凋亡素）[19]，研究表明， pRSV-VP3 转染体外培养的鸡单核细胞，可诱导细胞发生类似于 CIAV 感染明 VP3 的表达引发了 CIAV 诱导的细胞凋亡过程[20]。

图2-1 VP1基因的PCR扩增结果 图2-2 VP2基因的PCR扩增结果1:VP1基因扩增产物；M:MarkerⅣ 1:VP2基因扩增产物；M:MarkerⅣ2.3.2 IRES 序列的克隆以本实验室保存的 pMD18-T-IRES 质粒为模板，以 IRES-F、IRES-R 为引物扩增 IRES 片段，增产物经 0.8％琼脂糖凝胶电泳证实得到了约 612 bp 的特异片段，与预计的目的片段大小一致（2-3）。bp

图2-1 VP1基因的PCR扩增结果 图2-2 VP2基因的PCR扩增结果1:VP1基因扩增产物；M:MarkerⅣ 1:VP2基因扩增产物；M:MarkerⅣ2.3.2 IRES 序列的克隆以本实验室保存的 pMD18-T-IRES 质粒为模板，以 IRES-F、IRES-R 为引物扩增 IRES 片段，增产物经 0.8％琼脂糖凝胶电泳证实得到了约 612 bp 的特异片段，与预计的目的片段大小一致（2-3）。bp

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本文编号：2759543