猪Viperin基因的抗炎和抗病毒作用初探
【学位授予单位】:河南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.4
【图文】:
N 末端结构是由第 1-42 位氨基酸残基构成,且氨基酸序列在各个物种中表现较大的差异性。N 端蛋白区域包含两亲性的 α 螺旋结构,位于基因的第 7-42 位氨基酸残基,可以构成亮氨酸拉链,不具有形成二聚体等拉链功能,可以结合到膜表面并诱导其扭曲[15]。保守的中间区域位于 Viperi蛋白的 77-209 氨基酸残基,包含 M1-M4 共 4 个相对保守的基本序列,其基因序列和 S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)激酶家族的 MoA/PQQ111 具有较高同源性。其中 M1 含有保守的 C3xC2xC 序列,能够与催化硫铁簇结合,降低 SAM 向 5’脱氧腺苷转换,属于 SAM 酶超家族,故 Viperin 又称为 RSAD2(Radical SAM domain containing 2)[16]。由 218-361 氨基酸残基构成的 C 端部分突出到细胞质中,在不同的物种中,其氨基酸序列表现为高保守性,可能参与蛋白与蛋白互作或者介导酶活性的底物识别,发挥重要的抗病毒功能[17]。
促进下游转录因子干扰素调节因子(Interferon regulatory factorIRF3 和 IRF7 进而诱导合成 IFNβ,IFNβ 与细胞表面 I 型 IFNR 结合调导及转录激活因子(Signal transducers and activators of transcription 1形成异源二聚体,与 IRF9 形成干扰素刺激基因因子 3(Interferon-st合物,ISGF3 复合物发生核移位,结合干扰素刺激应答元件(IFN-stim及 ISG 启动子,诱导 Viperin 基因的表达[21, 22]。依赖性通路中,巨细胞病毒(Cytomegaoviyns,CMV)[23]、VSV[24]ephalitis virus,JEV)[25]等病毒通过结合细胞内过氧化物酶体上的线ndrial antiviral signaling protein,MAVS),激活 IRF1 或 IRF3,直接诱作用,如 VSV 直接通过转录因子 IRF1 刺激 Viperin 基因表达上调,Jctivating protein-1,AP-1)上调 Viperin 基因表达[25]。HCMV 囊膜糖]。VSV 由 MAVS 激活 IRFs 诱导 Viperin 表达[27]。总之,干扰素依rin 基因的表达,干扰素非依赖性通路通过 IRFl 和 IRF3 调节 Viperin
图 3 荧光显微镜观察细胞转染结果(200×)A:对照;B:转染 PB 空载;C:转染 PB-Viperin。Fig.3 Fluorescence microscope observate cell transfection result(200×)A: no transfection; B: PB Vector transfection; C: PB-Viperin transfection .猪 Viperin 基因在 PK15 细胞中表达结果见图 4。由图 4 可知,与PB 空载转染组相比,PB-Vipe染细胞中的 Viperin 基因 mRNA 表达量明显升高,且差异性极显著(P < 0.001)。Western b果显示,与 PB 空载转染细胞相比,PB-Viperin 转染细胞中的 Viperin 蛋白表达量明显升高,异性显著(P < 0.0001)。提示猪 Viperin 基因在 PK15 细胞中实现了过表达。将 PB-Viperin B 空载转染的细胞经嘌呤霉素筛选,获得稳定转染的细胞系,分别命名为 PK15-PB-VipePK-PBV)细胞和 PK15-PB(PK-PB)细胞。
【参考文献】
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