金黄色葡萄球菌噬菌体VB-SavM-JYL01的生物学特性及其对兔坏死性肺炎实验治疗的研究

发布时间：2020-07-18 15:41

【摘要】：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种人畜共患病原菌,该菌引起的兔坏死性肺炎,常常导致兔急性呼吸窘迫,伴胸腔积液、咯血并快速致死,给兔养殖业造成巨大的经济损失。尽管一些抗生素对兔坏死性肺炎具有一定的治疗效果,但是金黄色葡萄球菌耐药菌株的出现以及抗生素药物残留问题,使得抗生素疗法受到了限制。因此,急需寻找一种既能够有效防治金黄色葡萄球菌感染引起的兔坏死性肺炎,又能在生产过程中提供无药残和安全健康的肉质品的生物治疗药物。噬菌体是一类能够感染细菌的病毒,它能够侵入细菌细胞内,特异性杀死细菌,为防控金黄色葡萄球菌感染引起的疾病提供了一种有前景的替代疗法。多项研究表明,噬菌体针对一些细菌感染具有很好的治疗效果,反映了噬菌体用于治疗的潜力。然而,目前噬菌体尚未用于预防和治疗由金黄色葡萄球菌引起的兔坏死性肺炎感染。为了研究噬菌体是否对金黄色葡萄球菌引起的兔坏死性肺炎具有治疗作用,本文进行了一系列的研究。首先,从临床获得的患有坏死性肺炎的兔肺中分离鉴定了多株金黄色葡萄球菌。药敏试验结果表明这些菌株具有多重耐药性,主要对青霉素,红霉素,氯霉素和氟喹诺酮类等抗生素具有抗性,但所有这些菌株对抗生素利奈唑胺敏感。随后,利用其中一株金黄色葡萄球菌分离株S6作为宿主菌,从污水样品中分离筛选出一株新的金黄色葡萄球菌噬菌体并将其命名为VB-Sav M-JYL01,并进一步研究了噬菌体VB-Sav M-JYL01的主要生物学特性。噬菌体VB-Sav M-JYL01在TSB固体平板上形成圆形透明噬斑,直径约为1-2 mm。透射电镜下观察噬菌体VB-Sav M-JYL01的形态,结果显示该噬菌体具有正二十面体的头部和可伸缩的尾部,表明该噬菌体属于肌尾噬菌体科。当感染复数为0.01时,噬菌体的效价达到最大值,约为9.8×109 PFU/m L。一步生长曲线测定结果显示,噬菌体VB-Sav M-JYL01的潜伏期约为20 min,爆发量约为100 PFU/cell,表明该噬菌体具有高效的裂解活性。此外,噬菌体宿主谱测定结果显示,该噬菌体有较宽的宿主谱,裂解率为75.7%(50/66)。噬菌体VB-Sav M-JYL01全基因组学研究表明,该噬菌体基因组全长141,384 bp,含有219个开放阅读框,其中未发现与细菌毒力、抗生素抗性以及溶原生成相关基因,这为该噬菌体用于治疗性研究奠定了基础。本文进一步评估了噬菌体VB-Sav M-JYL01对兔坏死性肺炎模型的治疗效果。体内实验结果显示,单次鼻内给予3×109 PFU的噬菌体VB-Sav M-JYL01可在48 h有效提高兔存活率至90%(9/10),而通过PBS或利奈唑胺治疗后的保护率分别为10%(1/10)和80%(8/10)。兔肺部菌落计数结果表明,噬菌体VB-Sav M-JYL01治疗组在感染24 h后肺部菌载量为4.18×104 CFU/g,与PBS治疗组(7.38×107 CFU/g)以及利奈唑胺治疗组(3.12×105 CFU/g)相比显著降低。此外,与PBS治疗组相比,噬菌体VB-Sav M-JYL01能够显著改善肺组织损伤程度。同时,噬菌体VB-Sav M-JYL01治疗后的兔血液及肺泡灌洗液中的总蛋白、杀白细胞素(PVL)、α-毒素(Hla)以及相关细胞因子的含量显著低于PBS处理组。以上研究结果表明,金黄色葡萄球菌噬菌体VB-Sav M-JYL01具有高裂解活性和宽宿主谱,且在体外和体内均能有效的杀死金黄色葡萄球菌,该噬菌体在治疗金黄色葡萄球菌感染以及作为防治金黄色葡萄球菌引起的兔坏死性肺炎方面具有很大的潜力。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.291
【图文】：

定和药敏试验分析系统色葡萄球的分离与鉴定划线对菌株进行了分呈金黄色。革兰氏染色后蓝紫色，形态呈葡萄串核糖核酸凝胶电泳结果 bp 位置处出现一条目的萄球菌，并依次将其命1，S12，S13，S14，S1，表明这 16 株分离的金

图 1.2 显微镜下分离菌的颜色与形态r and morphology of the isolated bacteria u图 1.3 分离菌 Gap 基因的 PCR 鉴定ig 1.3 PCR identification of isolate Gap g

第二篇 研究内容 第一章 兔坏死性肺炎金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及 物敏感性测图 1.2 显微镜下分离菌的颜色与形态 1.2 The color and morphology of the isolated bacteria under the micros

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本文编号：2761095