塔河马鹿源副结核分枝杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

发布时间：2020-07-20 12:37

【摘要】：目的:副结核病又称约翰病,是由副结核分枝杆菌引起牛、羊、马鹿等反刍动物的一种渐进性消瘦和肉芽肿肠炎为主要特征的传染病。目前,我国马鹿的存栏约13万头,主要有3个品种,分布在塔里木河流域的塔河马鹿是其中之一,养鹿业已成为当地畜牧业发展的重要组成。但由于管理环节的缺失和防疫意识的淡薄,导致以腹泻、消瘦为主要特征的各种疫病高发,发病原因与副结核感染有关,但尚未进行相关的深入研究。为此,本研究以塔河马鹿为对象,进行以下方面研究:方法:采用现场流行病学调查的方法,收集塔河流域某马鹿养殖场的环境、气候、病史等现场资料,查找可能的传染源及传播途径;采集塔河流域5个鹿场共214份公鹿血清,采用ELISA方法调查副结核病的感染现状;分别无菌采集疑似副结核病感染的2头马鹿肠内容物和肠系膜淋巴结,去污处理后接种于卵黄培养基中进行病原的分离纯化;采用生理生化、培养特性结合16S rRNA、IS900的PCR扩增进行种的鉴定,同时扩增DMC、IS1311基因进行亚型鉴定;选择最适的培养基并优化细菌培养方法;以BALB/c小鼠为试验模型进行动物回归试验。结果:试验一塔河马鹿副结核病的现场和血清流行病学调查现场调查发现,鹿场内奶牛是可能的传染源,粪口途径为主要的传播途径;鹿场间为公鹿的引种更换;血清流行病学调查结果表明,5个试验鹿场均有副结核病的感染,其总阳性率为7.01%(15/214),最高为11.32%(6/53),最低为2.70%(1/37)。试验二副结核分枝杆菌的分离鉴定及培养条件优化从肠内容物中分离到一株副结核分枝杆菌,将该菌命名为MAPxj-RD。通过细菌培养查明了MAPxj-RD的生物学特性,16S rRNA、IS900、DMC、IS1311与保护性抗原基因检测均为阳性,两种亚型鉴定方法均显示分离株为C型副结核分枝杆菌;最适培养基为卵黄培养基;HPC去污比HPC和抗生素共同去污更容易分离到副结核分枝杆菌;初代接种物二次盲传后具可分离到副结核分枝杆菌;当液深4 mm时细菌生长速度更快。试验三副结核分枝杆菌MAPxj-RD的动物试验动物试验表明,小鼠体重在试验周期中呈上升趋势,而检测粪便后未发现副结核分枝杆菌;使用优化的培养方法从小鼠的肝脏中成功分离到MAPxj-RD;病理切片经抗酸染色与HE染色后均发现MAPxj-RD的存在,且引起了与副结核病相似的病理变化;经PCR检测发现每只小鼠脏器中均有MAPxj-RD,肠组织中检出率最高,为100%(6/6),肾脏最低,为16.67%(1/6)。结论:综上,副结核病在塔河流域的鹿场已普遍存在,自然环境与鹿场环境极利于副结核病的传播,该病已成为鹿场的重要传染病;分离到一株C型副结核分枝杆菌并命名为MAPxj-RD,查明了MAPxj-RD的生物学特性与分子特性;对细菌培养方法进行了优化,并证明该方法可提高分离成功率,缩短培养时间;动物试验证明MAPxj-RD具有较强的致病性,确为塔河马鹿发病的致病菌。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S858.23
【图文】：

MAPxj-RD单个菌落抗酸染色结果

塔河马鹿源副结核分枝杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

MAPxj-RDIS900基因序列遗传分析

塔河马鹿源副结核分枝杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

MAPxj-RDIS900基因PCR电泳图

【参考文献】