褪黑素对安格斯牛精液冷冻及体外胚胎发育的影响

发布时间：2020-07-26 17:36

【摘要】：精子的冷冻保存、卵母细胞的体外成熟和胚胎体外培养是人工繁育动物的技术基础。提高精子冷冻后的活力、提升体外卵母细胞成熟和体外生产胚胎质量,对动物生产有重要意义。褪黑素(melatonin,MT)主要由松果腺合成,与生殖行为和内分泌调节密切相关。褪黑素及其代谢产物可以直接清除活性氧,使谷胱甘肽的水平增加,抑制细胞内促氧化酶活性。褪黑素是减少细胞氧化损伤最有效的物质之一。本文通过在培养液中添加褪黑素,对其在精子冷冻、卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎发育过程中的影响进行了研究。结果如下:1.选取3头安格斯牛(n1、n2、n3)采精,在其精液冷冻稀释液里添加不同浓度MT(0、10~(-3)、10~(-4)和10~(-5)M),研究MT对精子活力、质膜完整性、线粒体膜完整性、顶体完整性以及在冷冻过程中产生的ROS水平差异。研究发现,10~(-3)M和10~(-4)M MT处理组对安格斯牛的精子的活力、质膜、线粒体膜完整性都有显著性提高。添加10~(-3)M MT后,精子的顶体完整性比对照组显著提高,且使精液的ROS水平降低约2倍。因此,在冷冻精液的过程中,添加10~(-3)M MT为最佳浓度。2.研究不同浓度MT(0、10~(-7)、10~(-8)、10~(-9)和10~(-10)M)对卵母细胞成熟的影响和MT对细胞内活性氧水平的影响。与对照组相比,添加10~(-7)M MT对卵母细胞的成熟率有显著提高,并能使ROS水平降低2.4倍。3.在体外培养液中添加10~(-7)M MT,能显著提高胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数。同时,在此过程中检测8-cell的ROS水平,MT处理8-cell能使ROS水平降低1.6倍;与对照组相比,10~(-7)M MT能显著提高在胚胎(8-cell)发育过程中的抗氧化、抗调亡基因(CAT、BCL-2)和发育相关基因(C23、MFN1)的表达,降低促调亡(Caspase-3、BAX)基因的表达。综上所述,本文较为系统地研究了褪黑素对安格斯牛精液冷冻、卵母细胞成熟、体外受精以及体外胚胎发育的影响,不同浓度的褪黑素所起的作用有差异。添加10~(-3)M MT对精液冷冻效果最佳;添加10~(-7)M MT可以显著提高卵母细胞成熟率和受精胚胎发育率。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S823
【图文】：

示意图,速率对,冷冻过程,氧化作用

图 1. 1 在冷冻过程中，降温的速率对细胞冷冻影响示意图[9]atic diagram of the effect of cooling rate on cell freezing during freezin的氧化作用

褪黑素,烷基胺,N-乙酰转移酶,脱羧酶

图 1.2 褪黑素在脊椎动物中的经典生物合成途径；1-色氨酸脱羧酶；AANAT，芳基烷基胺 N-乙酰转移酶；ASMT，乙酰血褪黑素脱乙酰酶；虚线表示褪黑素乙酰色氨酸 O-甲基转移酶的次要途径；合成[22]

精子活率,对照组,褪黑素,冷冻精液

冷冻精液精子活率的影响（ab 代表与对照组相比结果提高 p>0.0相比结果有差异 P<0.05）latonin on bovine frozen-thawed sperm motility.(ab represents improv>0.05), c represents a difference between the results of the control grocontrol group P<0.05).精子活力进行了整体评价，结果如下：10-3M、10-4M 和，10-3M MT 和 10-4M MT 显著高于对照组（55.53%、53M MT、10-4M MT 之间差异并不显著（P>0.05，详细结

【参考文献】