enJSRV-Env通过激活MAPK信号通路调节绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的初步研究

发布时间：2020-07-26 23:05

【摘要】：内源性逆转录病毒(Endogenous retrovirus,ERVs)的基因已经普遍的存在于脊椎动物的基因组中。一些内源性逆转录病毒与其宿主胎盘的发育关系密切。迄今为止已经在绵羊基因组中发现至少27个拷贝数与外源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)相关的内源性逆转录病毒,这些内源性逆转录病毒与其对应的外源性逆转录病毒(Exdogenous retrovirus)高度相关,故称其为内源性绵羊肺腺瘤病毒(Endogenous jaagsiekte sheep retrovirus,enJSRVs)。enJSRV在绵羊胎盘形成过程中有重要的作用,并且enJSRV囊膜蛋白(Env)能够在绵羊绒毛膜滋养层细胞融合过程中起促进作用,但是enJSRV囊膜蛋白的作用机制尚不明确。因此,本试验针对enJSRV囊膜蛋白促进绵羊绒毛膜滋养层细胞融合的机制展开研究。本试验利用免疫组织化学染色法检测enJSRV囊膜蛋白在绵羊胎盘中的主要表达区域;继而培养绵羊绒毛膜滋养层细胞并瞬时转染重组表达质粒pEGFP-C1/enJSRV-env到细胞中,同时添加Erk、p38及JNK这3种蛋白激酶的抑制因子,利用Western Blot法检测enJSRV囊膜蛋白对Erk]/2、p38及JNK磷酸化水平的影响,分析enJSRV囊膜蛋白能否激活绵羊绒毛膜滋养层细胞中MAPK信号通路;利用激光共聚焦显微镜观察添加3种抑制因子后与未添加抑制因子的细胞之间细胞融合数量的变化;瞬时转染重组表达质粒pEGFP-C1/enJSRV-env到293T细胞中,并检测Erk1/2、p38及JNK磷酸化水平的变化,再经过与绵羊绒毛膜滋养层细胞的结果比照,初步分析enJSRV囊膜蛋白在不同细胞内作用机制的差别。结果显示,enJSRV囊膜蛋白主要在绵羊胎盘组织的绒毛膜滋养层细胞中表达;通过Western Blot检测到转染重组表达质粒pEGFP-C1/enJSRV-env的绵羊绒毛膜滋养层细胞中,Erk1/2、p38和JNK磷酸化水平均显著高于对照组、转染空质粒pEGFP-C1组及添加抑制因子组(P0.05),添加3种抑制因子后,与其相应蛋白激酶的磷酸化明显被抑制;通过激光共聚焦显微镜观察到转染重组表达质粒pEGFP-C1/enJSRV-env组平均每个视野有1.6个绵羊双核绒毛膜滋养层细胞,而添加Erk、p38和JNK抑制因子后,平均每个视野下分别可观察到0.6个、0.8个和0.8个绵羊双核绒毛膜滋养层细胞;通过Western Blot法检测到,转染重组表达质粒pEGFP-Cl/enJSRV-env的293T细胞中,p38磷酸化水平显著高于对照组和转染空质粒pEGFP-C1组(P0.05),]NK磷酸化水平极显著高于对照组及转染空质粒pEGFP-C1 组(P0.01)。本研究结果表明,enJSRV囊膜蛋白能够激活绵羊绒毛膜滋养层细胞中MAPK信号通路,并且可能通过激活MAPK信号通路调节绵羊绒毛膜滋养层细胞融合过程。通过比较两种细胞中Erk1/2、p38及JNK磷酸化水平的变化发现,enJSRV囊膜蛋白在不同种类细胞中的作用机制可能存在一定的差异。
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S852.65

【参考文献】

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2 徐萌杰;刘淑英;;enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊胎盘组织中的表达[J];中国兽医学报;2011年12期

3 吴晓莉;齐景伟;刘淑英;徐萌杰;;Real-Time PCR和组织原位杂交法检测enJSRV在绵羊胎儿免疫器官及肺脏中的表达[J];畜牧兽医学报;2010年08期

4 张宇飞;刘月;张亚坤;刘淑英;;靶向enJSRV env基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效率的测定[J];中国兽医科学;2013年01期

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6 孙晓林;杜方原;刘淑英;;外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析[J];畜牧兽医学报;2016年08期

本文编号：2771415