槲皮素促进猪肠上皮细胞利用蛋白质的作用及机制

发布时间：2020-07-27 20:17

【摘要】：本试验以猪肠上皮细胞作为受试对象,以槲皮素作为受试物,将槲皮素溶解在二甲基亚砜(DMSO)中,通过在细胞培养液中添加0.2%DMSO及不同浓度的槲皮素,探讨槲皮素对猪肠上皮细胞利用蛋白质的作用及机制。试验结果表明:(1)与对照组相比,0.001~1 mg/L槲皮素均能促进细胞增殖,其中1 mg/L槲皮素作用效果最好。在上述试验基础上,对槲皮素的适宜浓度进一步筛选。发现24~144 h内,槲皮素的半数有效浓度分别为0.50、4.17、1.10、2.08、3.52、5.43 mg/L。(2)通过BCA法检测细胞内蛋白质含量发现,与对照组相比,槲皮素作用24 h时,试验各组间无显著差异(P0.05);作用48 h时,0.4、0.8、1.6 mg/L槲皮素组细胞内蛋白质含量显著增加(P0.05);作用72 h时,0.4 mg/L槲皮素组细胞内蛋白质含量显著增加(P0.05)。(3)通过荧光定量法检测细胞内转运载体表达发现,与对照组相比,1.6 mg/L槲皮素作用24 h可极显著提高载体ASCT2、ATA2、rBAT、小肽转运载体mRNA表达(P0.01);作用48 h,可极显著提高载体rBAT、y~+LAT1、y~+LAT2 mRNA表达(P0.01),显著提高小肽转运载体mRNA表达(P0.05);作用72 h,可极显著提高载体EAAC1、ASCT2、ATA2、LAT2、CAT-1、rBAT、y~+LAT1 mRNA表达(P0.01),显著提高小肽转运载体mRNA表达(P0.05)。结果表明,1.6 mg/L槲皮素作用效果较显著,能促进氨基酸、小肽转运载体表达。(4)通过荧光定量法检测细胞内信号通路表达发现,与对照组相比,作用24 h时,1.6mg/L槲皮素可显著提高结节性硬化复合物1(TSC1)mRNA表达(P0.05),极显著提高雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、真核起始因子结合蛋白1(4E-BP1)、真核起始因子4B(eIF4B)、真核起始因子4A(eIF4A)、核糖体蛋白S6(RPS6)mRNA表达(P0.01);作用48 h时,显著提高真核起始因子4E(eIF4E)mRNA表达(P0.05),极显著提高4E-BP1、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)mRNA基因表达(P0.01);作用72 h时,极显著提高mTOR、4E-BP1、eIF4E、eIF4B、eIF4A、RPS6 mRNA表达(P0.01)。(5)通过Western Blot试验发现,与对照组相比,1.6 mg/L槲皮素极显著提高mTOR、eIF4A、eIF4E蛋白表达,极显著降低4E-BP1蛋白表达(P0.01)。1.6 mg/L槲皮素作用效果较显著,可通过提高信号通路蛋白在mRNA、蛋白水平的表达,激活mTOR信号通路,促进细胞内蛋白质的合成。综上所述,培养液中添加1.6 mg/L槲皮素能促进细胞增殖,提高细胞内蛋白质含量,此作用可能是通过促进氨基酸和小肽转运载体表达以及激活mTOR信号通路来实现的。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S828.5
【图文】：

槲皮素,化学式

]。AA 肉鸡饲粮中添加沙棘黄酮可提高胸肌肌苷酸含量及腺苷量，从而缓解热应激导致的肉质风味下降[77]。实验已证实，黄酮类化合物作为饲料添加剂适量添加可改善动，促进蛋白质消化吸收，增强蛋白质利用率，而槲皮素作为黄成分，具有相同的功能，但具体促进蛋白质利用的机制目前尚的生理功能及安全性素概述名槲皮黄素、栎精，是从天然植物中提取的重要的黄酮类化合化学命名法命名为 3，3’，4’，5，7-五羟基黄酮，是一种多，溶于甲醇、冰醋酸、丙酮和碱等[78]。人们日常生活中经常食，多种植物组织中均含有槲皮素及其衍生物。目前已发现超过菊花、山楂、槐花及鱼腥草、银杏叶等，在植物的花、叶及果在槐花中含量高达 4%[79]。二水槲皮素为黄色针状结晶，在 3于热乙醇溶液[80]。

猪肠,槲皮素

3 结果与分析3.1 槲皮素对猪肠上皮细胞增殖的影响3.1.1 MTT 法检测槲皮素促进猪肠上皮细胞增殖的适宜浓度设置 10 倍浓度梯度，对槲皮素的有效作用浓度进行初步筛选，通过 MTT 法检测 0.01、0.01、0.1、1、10 mg/L 槲皮素作用 10 天对猪肠上皮细胞增殖的作用。由图 3-1 可知，0.001~1mg/L 槲皮素与对照组相比，均能促进细胞增殖，其中 1 mg/L 槲皮素作用效果最好。

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对猪肠上皮细胞雷帕霉素靶蛋白信号通路CR 试验结果发现 72 h 结果较显著，在 72 h 基础上，选择信、4E-BP1、eIF4A、eIF4E，通过 Western Blot 法进一步进行对雷帕霉素靶蛋白蛋白表达的影响可知，与对照组相比，0.1 mg/L 槲皮素可显著提高细胞内 .6 mg/L 槲皮素可极显著提高细胞内 mTOR 蛋白表达（P<0.0

【参考文献】