纳米微球对IBRV灭活疫苗的免疫效果评价

发布时间：2020-08-07 18:39

【摘要】：牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛疱疹病毒-1型(Bovine herpesvius 1,BHV-1)引起的一种牛的发热型急性传染病,又称为“红鼻病”或“坏死性鼻炎”。目前国内对IBR的防控主要依赖于灭活疫苗,但存在着诸多弊端,如用常规灭活剂--甲醛灭活病毒过程中,病毒表面天然蛋白结构发生变化,导致免疫后效果不佳,以及免疫保护期较短等问题,均难以取得令人满意的免疫效果。因此,寻找新型安全无刺激性的灭活剂和能够有效延长免疫保护期的疫苗佐剂或辅助佐剂,已成为当前灭活疫苗研制中亟待解决的问题。本研究的目的就是探究一种可替代甲醛的灭活剂,并通过动物实验评价纳米微球对IBR灭活疫苗的免疫佐剂作用。这对IBRV新型灭活疫苗的开发与应用提供了新的研究基础与方向。本试验通过灭活时间和灭活浓度双因素确定了聚维酮碘和甲醛的最优灭活条件。以细胞盲传三代观察CPE、无菌检验和台盼蓝染色等方法,筛选聚维酮碘的最佳灭活浓度和灭活时间。结果表明8%的聚维酮碘作用48 h可彻底灭活IBRV,0.3%的甲醛作用48 h时可彻底灭活IBRV。为了确定聚维酮碘对细胞的毒性,本研究向MDBK细胞培养液中分别添加不同浓度的聚维酮碘和甲醛,比较二者对MDBK细胞毒性作用,结果表明0.5%的甲醛即可导致绝大多数细胞死亡,而18%的聚维酮碘对细胞无任何毒性,直到20%时才对细胞产生毒性导致部分细胞死亡。上述结果说明,聚维酮碘可彻底灭活IBRV,与甲醛相比对细胞的毒性较小,可代替甲醛灭活剂制备灭活苗。为了探究聚苯乙烯纳米微球(PS)作为辅助佐剂,承载IBRV后的免疫增强作用。本试验以EDC活化聚苯乙烯微球通过一步法偶联IBRV,再以灭活偶联后的IBRV制成灭活苗免疫昆明系小白鼠。通过间接ELISA方法对血清IgG进行检测,结果表明,PS+206佐剂组抗体水平最高,免疫持续期最长,与206佐剂组、灭活苗+PS组和PS对照组这三组相比差异极显著(P0.01)。流式细胞技术检测血液中CD4~+和CD8~+细胞动态变化,结果表明,注射PS+206佐剂组的小鼠血液中CD4~+和CD8~+T细胞亚群占总淋巴细胞的百分比最高,含量持续期最长,与206佐剂组相比差异极显著(P0.01)。血清中IFN-γ、IL-4和IL-6测定结果表明,三种细胞因子的含量均是PS+206组最高,持续期最长,与206佐剂组、灭活苗+PS组和PS对照组这三组相比均差异极显著(P0.01)。以上结果说明,PS作为辅助佐剂可提高灭活苗的免疫效果,并能延长机体免疫持续期,克服了传统灭活苗免疫持续期短的难题。综上所述,聚维酮碘可替代甲醛灭活IBRV,PS作为辅助佐剂可提高灭活疫苗的免疫效果,并延长机体免疫持续期。
【学位授予单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S852.4
【图文】：

对照组,细胞,病毒灭活,孔细胞

对照组细胞（200x）

聚维酮碘,灭活,细胞病变

c d图 2-2 聚维酮碘在不同灭活条件下未彻底灭活 IBRV 导致细胞病变（200x）Fig. 2-2 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 2%聚维酮碘灭活 24 h 的条件下，MDBK 细胞产生变大变圆的 CPE；b:在 4%聚维酮碘灭活 24 h 的条件下，c:MDBK 细胞产生变大变圆的 CPE；在 6%聚维酮碘灭活 24 h 的

聚维酮碘,盲传,未病,细胞

c d图 2-3 不同灭活条件下的聚维酮碘在盲传三代后细胞未病变（200x）Fig. 2-3 Partially inactivated IBRV in povidone iodine oral solution under different inactivationconditions (200x)注：a:在 8%聚维酮碘灭活 IBRV 48 h 条件下，盲传三代后 MDBK 细胞未发生 CPE；b:在 8%聚维酮碘灭活IBRV72 h 的条件下，盲传三代后 MDBK 细胞未发生 CPE；c:在 12%聚维酮碘灭活 IBRV 48 h 的条件下，

【参考文献】