山羊PTEN基因的变异位点及组织表达分析

发布时间：2020-08-12 18:46

【摘要】：PTEN(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten)基因是人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因,属于蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrosine phosphatases,PTP)基因家族。PTEN基因最初被认为是抑癌基因,但是PTEN基因也在哺乳动物细胞的生长、器官的发育以及糖代谢、胰岛素抵抗等方面发挥作用。因此,探究PTEN基因在山羊上的表达特征和作用机制具有重要意义。本研究通过克隆山羊PTEN基因编码区全序列以及3'UTR区域变异位点的检测,探究PTEN基因的分子特征。RT-qPCR的方法检测了其在胚胎期90天(E90)、胚胎期135天(E135)和出生后90天(P90)的山羊心、肝、脾、肺、肾、脑、腰大肌和背最长肌8个组织中的表达差异以及在山羊前体脂肪细胞分化过程中PTEN基因的表达特征。主要结果如下:1、简州大耳羊PTEN基因的编码区长度为1212 bp,编码403个氨基酸。其GenBank登录号为:MG923848。PTEN蛋白是亲水蛋白,含有26个磷酸化位点,1个信号肽。山羊的PTEN基因序列与绵羊,牛PTEN基因亲缘关系较近,与马PTEN基因亲缘关系最远。在PTEN基因的3'UTR区发现了3个SNPs和1个indel,分别是g.84 TC(rs648781865),g.996 TC(rs 661678942)和未报道的g.1007 CA,g.1103_104 de lAT。2、RT-qPCR结果显示PTEN基因在E90、E135和P90简州大耳羊的心、肝、脾、肺、肾、脑、腰大肌和背最长肌组织中均有表达。E90的肝组织中检测到的PTEN基因表达水平相对较高(P0.05);E135的肺组织中检测到的PTEN基因表达水平相对较高(P0.05),心和腰大肌中表达水平较低(P0.05);P90的脾组织中PTEN表达量较高(P0.05)。蛋白免疫印迹杂交结果显示,在E135的8个组织中,PTEN蛋白在心、脾和脑组织中表达量显著高于其他五个组织(P0.05),而背最长肌中的表达量显著低于其他7个组织(P0.05)。此外,PTEN蛋白在简州大耳羊肺组织中的表达量随日龄呈下降趋势。3、DAB显色原位杂交的方法检测了PTEN基因在P90简州大耳羊8个组织中的分布规律。结果发现PTEN基因在肝、脾、肺和肾组织中表达较高,在心、脑和腰大肌和背最长肌中表达较低,与RT-qPCR的结果一致。4、探究PTEN基因在山羊前体脂肪细胞分化过程中的表达变化,结果PTEN基因的表达量总体呈现逐渐降低的趋势,在分化第10天略有升高。而且分化第2天PTEN基因的表达量显著高于其他4个时间点(P0.05)。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S827
【图文】：

脂糖,凝胶电泳,纯度,条带

析测脂糖凝胶电泳检测从组织中提取的总 RNA，得出 28S 条带比 18S 条带亮度更高，表明总 RNA 质量现，所提取的组织样品总 RNA 的 A260/A280 的样品总 RNA 纯度较好，可以用于之后的实验。

基因扩增,模版,片段,目的

图 3.1 总 RNA 电泳检测图Fig 3.1 Agarose gel electrophoresis analysis of total RNA克隆与序列分析克隆结果取的总 RNA 合成 cDNA 为模版进行 PCR 扩增，之后取检测。三个目的片段分别为 485 bp、1180 bp 和 489 bp

进化树,基因,氨基酸序列,绵羊

2.3 PTEN 基因序列同源性分析及进化树的构建用 DNAman6.0 将简州大耳羊 PTEN 基因氨基酸序列与其他物种 PTEN 基因氨基序列进行比对。结果显示 PTEN 氨基酸序列与绵羊（Ovis aries）、牛（Bos taurus）（Sus scrofa）的相似性分别达到 96.28%、100%和 99.51%。使用 MEGE6.0 软件构建 PTEN 基因氨基酸序列的分子进化树。结果显示山羊EN 基因与野牛，绵羊，牛 PTEN 基因亲缘关系较近，与马 PTEN 基因亲缘关系，不同物种 PTEN 基因的氨基酸序列差异如图。

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