诸城市三种毛皮动物源大肠杆菌流行病学调查及遗传相关性分析

发布时间：2020-08-21 02:31

【摘要】：大肠埃希氏菌能够引起动物和人的大肠杆菌病。它广泛存在于动物和人的肠道中,既属于肠道常驻菌,又是一种条件致病菌,一些特殊的血清型或者其他非传染性条件和传染性病原诱发动物和人感染此菌。为研究诸城地区的水貂、狐狸、貉子中大肠杆菌的流行病学情况以及分离菌株之间的遗传相关性,于2017年8月份从诸城地区三个距离较近的养殖场共采集粪便样品182份,其中水貂养殖场采集78份、狐狸养殖场采集97份、貉子养殖场采集7份。采集样品经处理后,进行增菌、选择性培养基培养和16SrRNA鉴定等方法对大肠杆菌进行分离鉴定。对分离菌株进行凝集实验,鉴定31种致病性血清型;采取纸片琼脂扩散法(K-B法)对分离菌株用14种常用抗生素的耐药情况进行检测;提取分离菌株DNA,检测24种耐药基因的存在情况以及I类整合子;对分离菌株进行Multilocus sequence typing(MLST)分型,分析其溯源和遗传进化关系。从而阐明大肠杆菌在该区域三个养殖场的流行传播情况。经分离鉴定,182份样品中的95份含有大肠杆菌,阳性率为52.20%(95/182)。经凝集实验鉴定,17株大肠杆菌属于可致病血清型,包括10种不同的类型,其中O104:H4测出率最多为23.53%(4/17);药敏实验的结果表明,95株分离的大肠杆菌对14种抗生素的耐药表现有差异,对氨苄西林的耐药性最高,为91.58%(87/95);对头孢西丁表现为敏感,耐药率分别为1.05%(1/95)。共检测出15种耐药基因,其中检出率最高的为喹诺酮类的耐药基因qnrS,检出率为66.32%(63/95),检测到31株大肠杆菌携带I类整合子,检出率32.63%,I类整合子检测结果发现,菌株中共携带7种耐药基因盒,最多的基因盒为dfrA27+aadA2+qnrA(17/31),携带整合子的分离株中多重耐药的菌株比率93.55%。SAS软件结果表明耐药基因的存在与大肠杆菌对该类抗生素耐药彼此之间的相关性差异很大(P0.05),与某一特定的耐药基因存在有关,本实验中耐药基因sul1的携带与复方新诺明耐药之间呈正相关。对95个ST序列分析后,得到55个不同的ST型,其中ST46序列型表现为最多,占总数的11.57%(11/95),没有出现新的等位基因型;存在七个克隆群(CC1~CC7)最大的克隆群为CC6,由ST10与ST218、ST48、ST215、ST744、ST43、ST1634、ST656、ST716所组成,分离菌遗传进化关系比较近的不同菌株趋向于来自同一物种;其中ST189、ST10、ST46分别对应克隆群CC5、CC6、CC7的克隆祖代;致病性血清型在遗传进化树上呈离散分布,与菌株之间的遗传关系远近和ST型无相关性;在耐药谱组成上无关联;同一克隆群中大部分在进化分支上比较近,存在部分菌株相差较远如st4147和st189,形成这种情况的原因可能与不同菌株七个管家基因序列之间的差异度大小有关;进化分支较近的分离株与其耐药谱的携带存在一定的关联性。本研究完成了诸城地区三个毛皮动物源养殖场中的水貂、狐狸、貉子所携带的大肠杆菌流行特点、致病性血清型分布,以及对常用抗生素的耐药规律以及耐药基因、整合子的携带情况等的分析。诠释了该地区大肠杆菌的分布特点、耐药规律,以及流行特点和遗传进化关系,从而针对可能发生的毛皮动物源大肠杆菌病的爆发,制定出有效的预防对策。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.61
【图文】：

图 3-1 大肠杆菌 PCR 扩增阳性产物Fig.3-1 PCR of E.coli positive isolates清型分布实验，从 95 株大肠杆菌中分离到 17 株大肠杆菌具有率为 17.89%（17/95）（表 3-2）。最常见的血清型为 O26:K71（n=3，3.16%），O86：K61（n=2，2.11%）、3（n=1，1.05%）、O8:K40（n=1，1.05%）、O15:K? 1.05%）、O9：K9（n=1，1.05%）、O20:K17（n=2li Serotype 的占有率为 5.26%，种类为 O126:K71、O的占有率为 3.16%，分别为 O29:K？、O28:K73、O15占有率 5.26%，分别为 O8:K40、O15:K?、O9：K9、O104：H4 占有率为 4.21%（图 3-2）。

诸城市三种毛皮动物源大肠杆菌流行病学调查及遗传相关性分析O28:K73 1.05%（1/95）O152：K? 1.05%（1/95）肠杆菌血清型O8:K40 1.05%（1/95）O15:K? 1.05%（1/95）O9：K9 1.05%（1/95）O20:K17 2.11%（2/95）肠杆菌血清型 O104：H4 4.21%（4/95）

1.05%）、O152：K? （n=1，1.05%）、O9：K9（n=1，1.05%）、O20:K17（n=2，2.11%）（图3-3）;致病性 E.coli Serotype 的占有率为 5.26%，种类为 O126:K71、O86：K61；侵袭性 E.coli Serotype 的占有率为 3.16%，分别为 O29:K？、O28:K73、O152：K?；产毒性E.coli Serotype 的占有率 5.26%，分别为 O8:K40、O15:K?、O9：K9、O20:K17；出血性 E.coli Serotype O104：H4 占有率为 4.21%（图 3-2）。表 3-2 大肠杆菌血清型鉴定结果Table 3-2 Serotype identification of isolated Escherichia coli血清型 所占比例致病性大肠杆菌血清型O126:K71 3.16%（3/95）O86：K61 2.11%（2/95）侵袭性大肠杆菌血清型 O29:K？ 1.05%（1/95）

【参考文献】

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本文编号：2798791