黄芩苷干预鸡毒支原体感染所致炎症损伤的分子机制

发布时间：2020-08-23 13:19

【摘要】：鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)是一种在全球范围内广泛存在的,可引起禽类慢性呼吸道病的一种病原微生物,属于支原体属。该病感染阳性率极高,在不继发感染的情况下死亡率较低,MG感染后,一般会引起饲料利用率降低,肉鸡的体重下降,以及造成雏鸡淘汰率上升,成年母鸡产蛋率下降等问题,给养禽业带来巨大的经济损失。临床上常见与其他疾病混合感染或由饲养管理不善、环境突变等因素引起的应激而导致MG的爆发,对禽类养殖业危害极大。由于支原体没有细胞壁结构,所以作用于细胞壁的抗生素对治疗本病无效,导致可选择的抗生素种类受限,加之抗生素的不合理使用,使得该病的药物研发尤为重要。中药组方治疗是根据MG的主要发病机制,以扶正祛邪为根本,达到标本兼治的目的,在临床实践中有很好的疗效,成为目前MG防治药物研发的热点方向。其中,黄芩苷是提取自中药黄芩根部的活性成分,国内外对该药物的研究十分重视。现代医学的大量研究表明黄芩苷具有明显的抗炎作用,能够有效抑制炎症反应的发生。对于黄芩苷作用机制的研究可以促进该药物的进一步发展及其在MG感染治疗方面的应用。本研究首先根据已有的MG感染模型的建立方法,利用被广泛认可的四种评价手段(SPA评分、格罗斯气囊病变评分、气管病变评分、气管黏膜厚度),对四种不同的感染方式(滴鼻点眼感染、气囊接种感染、混合感染、氢化可的松诱导感染)进行平行比较。结果显示以5×10~9CCU/mL的MG R株菌液用气囊接种的方法感染7日龄雏鸡,能够在感染后5 d观察到MG感染的典型临床症状,病程发展速度适中,适合用于本研究的后续治疗试验。在黄芩苷治疗试验中,用确立好的MG感染模型构建方法,根据其病程发展特点,于感染后第三天开始将黄芩苷混于水中饲喂治疗,剂量为1.5 g/只·d,持续7 d。分别于饮水饲喂治疗后1、4、7 d剖检采样,采用ELISA、透射电镜和Western Blot、Real Time-PCR等分子生物学技术,探讨黄芩苷对MG感染造成的炎症相关基因表达的影响以及在TLR2/NF-κB通路中p65蛋白扮演的角色。病理学和超微结构观察结果:通过病理学临床表现的格罗斯气囊病变评分、气管病变评分和SPA评分可见在经过黄芩苷混水饲喂治疗7 d后能够降低靶器官受到的组织损伤,病变程度明显减轻,且有统计学差异。利用透射电镜观察肺和气管细胞的超微结构时可以看到,MG感染组气管部位纤毛细胞固缩退化,脱落坏死。肺部组织中,肺泡Ⅰ型上皮细胞损伤严重,胞质破碎。黄芩苷治疗组主要表现为纤毛肿胀,顶端形成蘑菇状水肿泡,有纤毛相互融合的现象,肺泡Ⅰ型上皮细胞损伤明显减轻。由此可见黄芩苷治疗试验可以有效改善MG感染所带来的组织和细胞炎症损伤。炎症相关因子和p65蛋白的表达结果:感染后4 d,MG感染组与空白对照组相比经ELISA试剂盒检测炎性因子IL-1β、TNF-α表达量明显升高;Western Blot检测TLR2和P-p65蛋白含量同样显著升高(P0.05)并于感染后7 d达到峰值,此时IL-1β、TNF-αmRNA的表达量也呈现出爆发性增长(P0.01);感染后10 d,炎性因子和相关蛋白表达量有所下降。相比较于MG感染组,黄芩苷治疗组在给药1、4、7 d后,炎性因子IL-1β、TNF-α表达量显著下降(P0.01)且相应蛋白TLR2和P-p65的表达量也明显低于MG感染组。综上,本试验在评价四种鸡毒支原体感染方式的基础上,用浓度为5×10~9 CCU/mL的MG R株菌液0.2 mL以气囊接种的方式感染7日龄雏鸡的模型进行黄芩苷抗MG感染作用及机理的研究。结果表明,黄芩苷能够通过抑制MG感染时炎性因子IL-1β、TNF-α的释放,干预MG感染造成的炎症损伤。同时,黄芩苷也能够通过抑制p65蛋白的磷酸化,干预TLR2-NFκB信号通路的活化,进而影响炎性因子的表达。
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S853.7
【图文】：

.1.3 四种感染方法中雏鸡组织病理学的差异.1.3.1 格罗斯气囊病变评分如图 3-2，从格罗斯气囊病变的结果可以看到，感染后 3、5、7 d，E 组相对于对照组极显著（P＜0.01），D 组在感染 5、7 d 时表现出极显著的差异（P＜0.01）并且 C 组随着的增加也表现出显著的差异（P＜0.05）。B 组滴鼻点眼的方式并没有与对照组有很大不P＞0.05）。组间进行比较时我们发现对于格罗斯气囊病变评分这项，D、E 两组在同一天果没有明显差异，而 C 组气囊评分接种随着天数的增加，与 D、E 的差异性在逐渐缩小

图 3-3 模型试验中气管病变评分Fig. 3-3 Mean tracheal lesion score in different models .如图 3-4，气管黏膜厚度的测定方法是取中段气管，切片读数选择视野下，上、下、左、右四个区域计算黏膜厚度，后计算气管黏膜平均厚度。我们可以看到感染后 3、5 d，D 和 两组相比较于其它组别表现出明显差异性（P＜0.05）。感染后七天组间差异不显著（P＞0.05）

图 3-3 模型试验中气管病变评分Fig. 3-3 Mean tracheal lesion score in different models .如图 3-4，气管黏膜厚度的测定方法是取中段气管，切片读数选择视野下，上、下、左右四个区域计算黏膜厚度，后计算气管黏膜平均厚度。我们可以看到感染后 3、5 d，D 和两组相比较于其它组别表现出明显差异性（P＜0.05）。感染后七天组间差异不显著（P＞0.05

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 巴英;;鸡毒支原体病的防治[J];现代农业科技;2014年23期

2 王晓晨;吉爱国;;NF-κB信号通路与炎症反应[J];生理科学进展;2014年01期

3 孟冬霞;贺东昌;武果桃;韩一超;姚敬明;任杰;赵娟;张伟业;孟帆;孙建钢;;超微粉中药对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验[J];中国兽医杂志;2013年08期

4 于培湖;王晓燕;;预防鸡毒支原体病要及时[J];农村养殖技术;2012年13期

5 孟冬霞;武果桃;任杰;;中药治疗鸡毒支原体病的研究进展[J];畜牧兽医科技信息;2010年12期

6 郭如彬;沈明华;顾文松;任凯;王华明;包惠玉;;中药复方提取物对人工诱发鸡毒支原体与大肠杆菌混合感染的疗效试验[J];中国家禽;2010年09期

7 李岩;李明;邝枣园;张韧;王宏敏;;黄芩苷对小鼠巨噬细胞环加氧酶-2和前列腺素E_2表达的影响[J];实用医学杂志;2009年24期

8 王少娟;;如何降低鸡毒支原体的发病率[J];中国牧业通讯;2009年19期

9 王春元;韦旭斌;王鲁;王秀敏;褚秀玲;崔小霞;申海清;;中药果根素对人工感染鸡毒支原体病鸡的治疗试验[J];中国兽医学报;2009年08期

10 秦璐璐;;鸡毒支原体PCR检测方法的建立[J];动物医学进展;2009年02期

相关会议论文 前1条

1 宋勤叶;张中直;陈德威;张冰;;鸡毒支原体油乳剂灭活苗对降低鸡毒支原体垂直传播作用的研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年

相关博士学位论文 前3条

1 郭梦尧;黄芩苷对小鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎的作用及机制研究[D];吉林大学;2014年

2 李静;白花丹醌抑制NF-κB对人胃癌细胞的作用及机制[D];华中科技大学;2012年

3 盛尊来;复方慢呼抗抗鸡毒支原体药效物质基础及质量控制的研究[D];东北农业大学;2012年

相关硕士学位论文 前7条

1 陈莹;鸡毒支原体脂质相关膜蛋白和GroEL蛋白诱导DF-1细胞释放IL-1β的研究[D];东北农业大学;2017年

2 刘素丽;牛支原体LAMPs诱导EBL细胞IL-1β释放的分子机制研究[D];中国农业科学院;2015年

3 田伟;TLR2和TLR6在鸡毒支原体感染的作用机理研究[D];华中农业大学;2013年

4 尹海鹏;黄芩苷对OX-LDL干预刺激后人脐静脉内皮细胞及VE-钙粘蛋白表达水平影响的作用机制[D];山东大学;2013年

5 丁亮;鸡毒支原体F弱毒疫苗对肉鸡生长及免疫性能影响的研究[D];安徽农业大学;2011年

6 田锋奇;黄芩苷的致过敏作用机制[D];郑州大学;2007年

7 周云凤;泰乐菌素新制剂对猪鸡支原体临床治疗与预防效果观察[D];南京农业大学;2007年

本文编号：2801575