苹果多酚与葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的研究

发布时间：2020-08-24 08:05

【摘要】：精液保存是人工授精技术的关键步骤之一。精液保存技术可使精液实现跨区域、跨时间的运输和使用,在很大程度上提高了良种公畜的利用率,也对家畜品种的繁育与改良具有重要意义。目前山羊精液保存最常见的是低温保存,但这项技术仍存在低温保存效果差和时间短的问题。因此,提高山羊精液低温保存效果和延长保存时间,对于推动山羊的良种繁育、增加后代数量意义重大。在精液的低温保存过程中,稀释液配方的不同以及精子发生脂质过氧化反应均会在很大程度上影响精液保存效果。为提高山羊精液低温保存效果,筛选安全稳定的稀释液配方,并寻找对山羊精液低温保存有积极作用的抗氧化剂,本试验首先选取了5种不同的山羊低温保存.稀释液配方,通过对山羊精液稀释并进行低温保存后精液质量的对比,筛选出最优配方;然后以最优配方作为基础稀释液,在其中分别添加10、20、40、60、80 mg/L的苹果多酚以及浓度为10、30、50、70mg/L的葡萄籽原花青素,检测精子活率.、顶体完整率、质膜.完整率、线粒体活性以及总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(.MDA)含量,探讨两种抗氧化剂对山羊精液低温保存的效果;最后联合添加苹果多酚+葡萄籽原花青素不同浓度组合40+0 mg/L、0+30 mg/L、20+10 mg/L、20+30 mg/L、40+10 mg/L、40+30 mg/L,探讨两种抗氧化剂的配伍效应。本研究获得的主要结果如下:1.五种不同配方山羊精液低温保存稀释液经过筛选,“配方2”的保存效果最好。低温保存5 d时,精子活率仍为45.42%,顶体完整率为61.26%,质膜完整率为47.24%,线粒体活性为43.3%,均显著高于其他试验组(P0.05)。五个配方中精液保存各项指标最低的为“配方1”,其各项指标均显著低于其他试验组(P0.05)。另外,精子活率与顶体完整率相关性最高,为极显著正相关(r=0.932,P0.01);精子活率与质膜完整率为极显著正相关(r=0.876,P0.01)。经对比选择,“配方2”效果最好,可作基础液以供后续试验使用。2.在“配方2”中加入一定浓度的苹果多酚可提高精液保存质量。苹果多酚的最适添加浓度为40 mg/L,保存5 d时精子各项指标均显著大于其余各组(P0.05),其精子活率可达49.31%,顶体完整率达到66.23%,质膜完整率为49.91%,线粒体活性为49.56%。而80 mg/L试验组保存效果最差,不仅各项指标均低于其余各组,而且保存5 d时精子顶体完整性、线粒体活性、T-AOC三个指标中显著低于对照组(P0.05)。3.在“配方2”中加入一定浓度葡萄籽原花青素可提高精液保存质量。葡萄籽原花青素的最适添加浓度为30 mg/L,其各项指标(MDA除外)在保存期间均最高,且5 d时精子活率、顶体完整率.、线粒体.活性、T-AOC显著高于其他组(P0.05),其精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%。而70 mg/L处理组较其他处理组保存质量显著降低(P0.05)。4.在“配方2”中联合添加不同的浓度苹果多酚+葡萄籽原花青素,结果表明20+10mg/L、20+30 mg/L、40+10 mg/L组均比单一添加组对精液保存质量有不同程度提高。保存效果最好的为20+30 mg/L试验组,保存5 d时精子活率、质膜完整率、顶体完整率、T-AOC均比其他试验组显著提高(P0.05),且MDA显著下降(P0.05),精子活率可达56.29%,顶体完整率高达70.03%,质膜完整率为55.20%,线粒体活性为53.53%。在五种稀释液配方中,“配方2”保存效果最佳,5 d时精子活率可达到45.42%,顶体完整率可达61.26%,质膜完整率为47.24%,线粒体活性为43.3%;精子质量检测指标中,精子活率与顶体完整率极显著正相关,精子活率与质膜完整率极显著正相关;苹果多酚与葡萄籽原花青素均能有效提高山羊精子低温保存品质,其中苹果多酚最适浓度为40 mg/L,5 d时精子活率可达49.31%,顶体完整率达到66.23%,质膜完整率为49.91%,线粒体活性为49.56%;葡萄籽原花青素最适浓度为30 mg/L,5 d时精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%;两种抗氧化剂具有协同作用,其中苹果多酚+葡萄籽原花青素最适组合浓度为20+30 mg/L,5 d时精子活率可达56.29%,顶体完整率高达70.03%,质膜完整率为55.20%,线粒体活性为53.53%。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S827
【图文】：

低温保存,保存期,氧化剂,处理组

Time0 10 30 50 700 87.60±1.23a87.27±1.14a87.24±1.51a87.34±1.23a87.53±1.86a1 77.11±1.31a78.80±1.13ab81.12±1.23b80.12±1.21ab78.34±1.64ab3 62.79±1.45a64.99±1.01b70.36±1.02c65.20±1.32b63.79±1.11ab5 43.19±1.44a47.37±1.04bc50.78±1.13d48.03±0.62c46.72±1.20b3.2.5 苹果多酚与葡萄籽原花青素对低温保存的山羊精子 T-AOC 的影响根据图 3-1 可知，苹果多酚浓度 40 mg/L 处理组的精子 T-AOC 最高，在保存期间均显著高于其余各组（P<0.05），20 mg/L 处理组次之，T-AOC 在保存期间显著高于除 40mg/L 外的其余四组（P<0.05），而 80 mg/L 处理组的精子 T-AOC 最低，在 3 d，5 d 时显著低于其余各组（P<0.05）。葡萄籽原花青素浓度 30 mg/L 处理组的精子 T-AOC 最高，在保存期间均显著高于其余各组（P<0.05），50 mg/L 处理组次之，T-AOC 在保存期间显著高于除 30 mg/L 之外各试验组（P<0.05）。其他各组之间在保存 3 d、5 d 时均有显著差异，精子 T-AOC 含量由高到低为 50 mg/L>10 mg/L>70 mg/L>0 mg/L。

山羊精液,低温保存,氧化剂,不饱和脂肪酸

图 3-2 不同浓度的两种抗氧化剂对低温保存的山羊精液 MDA 含量的影响Picture 3-2 Effects oftwo antioxidants on the concentration of MDA in goat semen3.3 讨论在低温保存过程中，精子会随着保存时间的逐渐变长而产生大量的自由基。自由基是一种能独立存在的活泼的化学实体，常见的有超氧阴离子自由基、羟自由基、一氧化氮自由基等（郑丽芳 2007）。在机体内，自由基对生物的信号转导、细胞程序性死亡、细胞分化分裂等具有重要作用。但活性氧自由基一旦过量时，则会发生氧化应激，损伤细胞蛋白与细胞膜脂质结构，还会导致基因突变，加速细胞死亡（胡文琴等 2004）。生物膜中脂质部分包含有大量不饱和脂肪酸，自由基对不饱和脂肪酸上的氢有很强的攻击性；另外，一些金属离子如 Fe2+等会促进氧化作用，这些因素使得细胞膜很容易发生脂质过氧化反应（陈伟等 2012）。因此，精液保存过程中，当 ROS 大量积累超过一定浓度后，会攻击含有大量不饱和脂肪酸的精子膜，使精子发生脂质过氧化反应。同时，ROS也会攻击顶体膜，使顶体酶提前释放而不能进行顶体反应，降低受精率，严重影响精子保存质量（ Gomez et al. 1996; Agarwal et al. 2003; Gharagozloo and Aitken. 2011）。本研

山羊精液,低温保存,多酚,苹果多酚

果多酚与葡萄籽原花青素组合对山羊精液低温保存 T-A1 Effects of different concentrations of apple polyphenols anocyanidinscombination on the concentration of T-AOC in go果多酚与葡萄籽原花青素组合对山羊精液低温保存 MD2 Effects of different concentrations of apple polyphenols anocyanidinscombination on the concentration of T-AOC in go

【参考文献】