猪细小病毒病原流行病学调查及其分离株NS1、VP2序列分析

发布时间：2020-08-24 08:41

【摘要】：猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)被认为是导致猪繁殖障碍的主要病原之一,其感染的临床症状表现为SMEDI(stillbirth,mummification,embryonic death and infertility,SMEDI),即死胎,木乃伊,胚胎死亡和不育,为全球养猪业带来了较为严重的经济损失。近年来,陆续在猪身上鉴定了几种新型细小病毒,即PPV2至PPV7。到目前为止,所有的猪细小病毒,除PPV外,均无其他猪细小病毒成功分离的报道。国内外对新型PPV主要是对其分子流行病学、基因序列等方面进行研究,对于新型PPV的致病性等方面的研究知之甚少。本研究对上述七种猪细小病毒在我省的流行情况进行了调研,并对猪细小病毒阳性样品进行病毒分离,以便进一步了解PPV在我省的流行情况及致病性。具体研究内容如下:1.PPV病原流行病学调查及病毒分离本研究运用PCR方法对来自五个猪场的197份肛门拭子、五个猪场的197份鼻腔拭子、九个猪场的389份血清以及2014年-2017年采集的屠宰场育肥猪310份肺脏进行PPV的病原流行病学调查。结果发现,肛门拭子中PPV检出率为2.5%(5/197),鼻腔拭子中PPV检出率为2.0%(4/197),血清中PPV检出率为1.0%(4/389),屠宰场育肥猪肺脏中PPV检出率为22.9%(71/310),说明PPV在粪便、鼻腔分泌物、血清及肺脏组织中均能检测到,且肺脏中的检出率极高。对PPV阳性样品进行病毒分离,仅在肺脏中分离到5株PPV。2.PPV分离株NS1、VP2序列分析从肺脏中分离到的5株PPV分离株序列大小均为4435bp,分离株之间的核苷酸同源性为99.8%~100%,氨基酸核苷酸同源性在99.8%~100%。PPV NS1基因全长为1989bp,编码662个氨基酸,PPV VP2基因全长为1740bp,编码579个氨基酸。5株分离株NS1、VP2之间的核苷酸同源性、氨基酸同源性均在为97%以上,证明肺脏中分离得到的分离株非常保守。对比NS1、VP2基因进化树发现,5株分离株与德国分离株亲缘性最近。3.新型PPV病原流行病学调查及病毒分离本研究运用PCR方法对两个猪场共154份血清进行新型PPV的病原流行病学调查。结果发现,PPV2的检出率为29.9%(46/154),PPV3的检出率为14.3%(22/154),PPV4的检出率为1.9%(3/154),PPV5的检出率为8.4%(13/154),PPV6的检出率为44.2%(68/154),PPV7的检出率为9.1%(14/154)。在血清样品中,PPV6的检出率最高,其次为PPV2。大部分新型PPV最早可以在4周龄中检测到,且新型PPV在育肥猪阶段检出率最高。对新型PPV阳性样品进行病毒分离,未分离到新型PPV。
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S858.28
【图文】：

PCR扩增

PPV的PCR扩增结果

特异性检测,细胞

00；1：HuN1；2：HuN2；3：HuN3；4：HuN4；5：HuN细胞阴性对照组；7：阴性对照图 2-3 PPV 分离株特异性检测结果Fig.2-3 The specificity test result of PPV isolation

毒液,细胞病变,细胞

A：出现病变 ST 细胞；B：正常 ST 细胞图 2-2 细小病毒病毒液接种 ST 细胞产生的细胞病变-2 Cytopathic effect of ST cell infected with supernatant of a suspected porcine parvovstrain.2 PPV 培养产物的 PCR 检测

【参考文献】