猪流行性腹泻病毒诱导的B细胞免疫应答研究

发布时间：2020-08-28 11:51

　　 猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PE DV)引起的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病毒是导致初生仔猪腹泻和死亡的主要致病原之一。成熟的初始B细胞能识别抗原,活化、增殖并分化成浆细胞,合成和分泌抗体而发挥清除病原体的作用。目前对于PEDV诱导B细胞免疫应答的机制尚不清楚,本研究通过体外实验,探究了来自不同年龄猪的B细胞分别对PEDV强毒株和弱毒株刺激后的免疫应答效应,旨在为深入阐明PEDV的感染免疫机制奠定基础。为了明确PEDV对B细胞的激活作用。分别采集初生仔猪、保育猪、成年母猪的前腔静脉血,采用密度梯度离心技术结合免疫磁珠分选细胞法,从外周血中分选CD21~+B细胞。用PEDV强毒株QY2016和弱毒株CV777分别感染不同年龄猪的B细胞,感染后24 h应用流式细胞术分析B细胞表面分子MHC II、CD80、CD54、CD27及mIgM的表达水平。强毒株QY2016和CV777株均不能刺激各年龄猪B细胞中表达表面分子MHC II、CD80和mIgM的细胞增加,但能引起初生仔猪B细胞表达协同刺激分子CD54与CD27的含量显著上升。野毒株QY2016感染组中M HC II~+、CD80~+、mIgM~+及mIgM~+CD27~+B细胞含量低于弱毒株CV777感染组。感染后0 h、24 h和48 h,应用ELISA检测细胞上清中IL-1、IL-22、IL-4、I L-6、IL-10、IFN-α、GM-CSF、M-CSF、IFN-α和TGF-β的表达水平。QY2016株和CV777引起均能引起初生仔猪B细胞分泌IFN-α和GM-CSF,保育猪B细胞分泌IL-1、IFN-α、IL-4,成年母猪分泌TGF-β,均不能引起各年龄猪的B细胞分泌I L-6和IL-10。其他细胞因子的分泌在不同毒株和不同年龄之间不同,但相对于仔猪和母猪,保育猪的B细胞分泌细胞因子的种类较多。感染后0 d、4 d和7 d,通过ELISA测定细胞上清中的IgM、IgA和IgG的含量,强毒株QY2016仅能够诱导保育猪B细胞分泌IgM和IgG。弱毒株CV777能诱导保育猪的B细胞可分泌IgM、IgA,母猪B细胞分泌IgA和IgG。强毒株和弱毒株均不能诱导初生仔猪B细胞分泌IgM、IgA和IgG。上述结果表明,PEDV诱导的B细胞表面分子表达、细胞因子与抗体应答与猪的年龄和毒株毒力的强弱密切相关。与弱毒株相比,强毒株刺激B细胞后的应答效应较弱,初生仔猪和母猪B细胞对PEDV的应答反应较保育猪低。
【学位单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.4
【部分图文】：

河北农业大学硕士学位（毕业）论文3 结果3.1 病毒蚀斑及 TCID50PEDV 感染 Vero-81 细胞后约 96 h 出现蚀斑。如图 1 所示，病毒蚀斑在显微镜下观察，细胞培养液本身含有酚红呈现颜色，而病毒蚀斑形成的局限性病变细胞区边缘呈现细胞核聚集现象、中央细胞大部分脱落。挑取蚀斑，将其接种 Vero-81 细胞，并进行传代，取 PEDV QY Clone F6 代细胞毒做 10-1~10-7稀释接种到 Vero-81 细胞，同时设置不接毒的阴性对照。感染后 120 h，按照 Reed-Muench 法计算该病毒液的 TCID50，TCID50=104.65/0.1 mL=105.65/mL。

猪流行性腹泻病毒诱导的 B 细胞免疫应答研究表 1 初生仔猪 B 细胞感染 PEDV 后 CD54+、CD80+、MHC-Ⅱ+细胞的百分1 The percentage of CD54+, CD80+and MHC-Ⅱ+cells in neonatal pigs B cells infectelesQY 2016 感染组QY 2016 groupCV777 感染组CV777 groupN3.966±0.757a2.833±1.193ab13.650±2.050 22.500±2.121B225.850±7.566 41.050±5.161C4小写字母分别表示差异极显著和差异显著（P<0.01 或<0.001 和差异显著 P<0.05）.ts (majuscule and minuscule) indicates significant differences (P<0.01or 0.001 and P<0.05) between gr

河北农业大学硕士学位（毕业）论文表 2 初生仔猪感染 PEDV 后 IgM+、CD27+、IgM+CD27+细胞Table 2 IgM+, IgM+CD27+cells in neonnate pig infected with PEDV组别GroupsQY 2016 感染组QY 2016 groupCV777 感染组CV777 group阴性对照Negative controlIgM+16.600±0.141 32.500±1.555A30.000±0.870aCD27+66.300±12.020 52.000±2.121 47.000±3.959IgM+CD27+3.750±0.919 8.750±0.070B2.900±0.282注：与 QY 2016 感染组相比，上标大写、小写字母分别表示差异极显著（P<0.05 和差异显著 P<0.01）Note: Compared with the PEDV QY infection group, Superccripts(majuscule or minuscule) indicates significates differences(P<0.01or P<0.05)between gruopsQY 2016CV777

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本文编号：2807544