河流型水牛与荷斯坦奶牛乳清蛋白、脂肪球膜蛋白的差异蛋白质组学分析

发布时间：2020-09-02 17:41

　　 水牛奶被誉为“奶中之王、乳中珍品”,具有较高的营养价值和经济价值,但其泌乳的分子机制尚不清楚。为此,本实验利用iTRAQ定量蛋白质组学技术对亚热带地区河流型水牛与荷斯坦奶牛的乳清蛋白、脂肪球膜蛋白进行差异蛋白质组学分析,为了解水牛奶与奶牛奶蛋白质层面的差异以及相关分子机理研究奠定了基础。实验结果如下:(1)对泌乳中期的河流型水牛与荷斯坦奶牛的乳清蛋白和脂肪球膜蛋白进行了 iTRAQ质谱检测,获得了乳清蛋白与脂肪球膜蛋白的蛋白质差异表达谱。共鉴定到346个乳清蛋白,筛选得到42个显著差异表达蛋白;共鉴定到370个脂肪球膜蛋白,筛选得到36个显著差异表达蛋白。(2)对显著差异表达蛋白进行了生物信息学分析,发现乳清显著差异表达蛋白主要富集的GO条目是防御反应,细胞溶解,细胞外区域,补体激活,抵抗细菌,对有机物的应激反应,维生素结合和转运,酶调控活性和受体代谢过程;主要富集的KEGG代谢通路是溶酶体和补体和凝血级联。脂肪球膜显著差异表达蛋白主要富集的GO条目是细胞外区域,硫化合物结合,对细菌的防御反应,蛋白质-脂质复合物,脂蛋白颗粒,脂质生物合成过程和乙醇生物合成过程;没有显著富集的KEGG代谢通路。(3)对乳清与脂肪球膜显著差异表达蛋白进行STRING蛋白质相互作用网络分析,发现血清白蛋白(ALB)在网络中形成明显的节点,其与多种乳清蛋白和脂肪球膜蛋白都有相互作用,预示它可能对泌乳生理有着重要的作用。(4)对筛选的显著差异表达蛋白进行层次聚类分析,从热图中可以看出三次生物学重复性较好,差异蛋白的表达量与质谱结果一致;对乳铁蛋白(Lactoferrin,LTF)和黄嘌呤氧化酶(Xanthine dehydrogenase,XDH)进行western blot检测,其在水牛与奶牛蛋白样品中的表达量与质谱结果相一致。通过生物信息学分析,预测水牛奶与奶牛奶的乳清差异蛋白与抗病力(KNG2,C3和C7)和乳品存储时间(LGMN,NAGA,PSAP,NPC2)相关。脂肪球膜差异蛋白与乳脂生物合成(CYB5R3,APOA1,APOE)相关。
【学位单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S823
【部分图文】：

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？然后将不同标记细胞的裂解蛋白等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据逡逑一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对定量，属于体内代谢标记法［６５］。实逡逑验操作流程见图１－３。？逡逑ＳＩＬＡＣ属于体内标记技术，更接近样品真实状态，在分离或纯化之前蛋白质已经被逡逑标记上，这极大地减少了样品前处理引起的误差。标记效率高达１００％，且标记效果稳逡逑定，不仅适合于进行全细胞蛋白分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量，每个样本只需要逡逑几十微克的蛋白量\　ｅ义希保板义

本文编号：2810907