吉林省鸡安卡拉病毒流行毒株的分离鉴定及其生物学特性分析

发布时间：2020-09-03 09:29

　　鸡安卡拉病是由禽腺病毒Ⅰ群血清4型引起的一种以心包积水肝炎综合征为主要特征的急性传染病。1987年,该病在巴基斯坦安加拉哥特地区发现第一起病例,因此以地名命名该病。据当时的报道,1988年夏季在费萨拉巴德发生该病,随后扩散到全巴基斯坦,造成了过亿只鸡死亡[1]。自此,该病在北美洲国家、欧洲国家、亚洲国家等多个国家相继被报道。1997年安卡拉病传入中国,由于当时在我国并没有造成大范围流行,因此未引起我国养禽业的重视[2]。但是,从2015年往后,安卡拉病在国内多个省市,如辽宁、河南、河北、湖北、江苏、吉林等地爆发,给养禽业造成了不小的经济损失。本实验对吉林地区九台、合心、龙嘉等多个养鸡场肉鸡疑似发病鸡群,采集病死鸡的肝脏,分离出一株野毒株,命名为FAd V4-JL16865株,提取DNA,并进行特异性引物的设计,进行PCR扩增,然后测序和序列分析。选择被感染的鸡的肝脏进行研磨,制成悬液,反复冻融三次,进行离心,取上清液,经尿囊腔接种9日龄的SPF鸡胚,盲传三代,观察鸡胚的生长发育和死亡情况。然后将第三代尿囊液接种到5日龄的SPF鸡胚,以观察鸡胚感染后的临床症状,是否死亡等情况,7天后,全部扑杀,采集心脏、肝脏等组织器官制作组织切片,经HE染色观察组织病理学损伤。然后对分离鉴定后的毒株做生物学特性分析。实验证明:从吉林地区采样的疑似发生鸡安卡拉病的不同鸡场分离到的17份病料中,分离到10株安卡拉病毒,接种鸡胚后能导致鸡胚精神沉郁、发育减缓,从第三天开始出现死亡的现象。组织学观察表明,本实验分离到的毒株能引起心肌细胞、肝细胞等多种组织发生颗粒变形、空泡变性以及坏死等损伤。从中选取一株表达比较好的毒株进行了全基因序列测序并分析,根据系统发育树显示,分离到毒株与I群禽腺病毒C亚群同源性最高,并与血清4型在同一分支上,证明了该毒株就是鸡安卡拉病毒。随后,针对吉林地区规模化养殖场进行采样,开展发病情况调查,统计发现在510份样本中,FAV4检出率为11.57%。结论:本实验成功分离鉴定一株鸡安卡拉病毒,命名为FAd V4-JL16865株,该毒株能使鸡胚发生肝炎等病理损伤,并给心脏、肝脏带来组织改变,对毒株进行热敏感性、酸碱度敏感性和有机溶剂等理化特性的检测,了解毒株的生物学特性;发病情况调查结果显示,在510份样本中,FAV4阳性检出率为11.57%。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.65
【部分图文】：

引物,第一,PCR扩增,样品

图 1.3 第一组安卡拉引物 PCR 扩增结果DL2000 Marker；1-7：样品；8：阴性对照) The amplification result of one team by Primer000 Marker；1-7：Sample set；8：blank contrast)

引物,PCR扩增,第一,样品

图 1.3 第一组安卡拉引物 PCR 扩增结果：DL2000 Marker；1-7：样品；8：阴性对照) 1.3 The amplification result of one team by PrimerL2000 Marker；1-7：Sample set；8：blank contrast)

全基因序列,引物,第三,PCR扩增

图 1.5 第三组安卡拉引物 PCR 扩增结果(M：DL2000 Marker；1：阴性对照；2-6：样品)Fig.1.5 The amplification result of three team by(M:DL2000 Marker；1：blank contrast；2-6：Sam果 Sanger 平台进行全基因组测序是目前实验阶段应用最为直接明了的测序法，核心原（ddNTP）的不含羟基，DNA 链每次加入 ddNTP，反确性比较高。对上述三组 PCR 产物进行回收测序，2据 FAdV-4 型（GU188428.1）设计的引物未成功扩增FAdV-4（No.DQ314840.2）进行测序。应用 Sanger 平了全长 43723bp 的全基因序列。然后根据全序列进行

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