三聚氰胺、盐酸小檗碱和潮霉素B三种化合物免疫学快速检测

发布时间：2020-09-10 11:28

　　 饲料安全是保障畜产品安全和人民身体健康的根本。目前一些药物在饲料中的滥用和违禁使用引发社会的广泛关注。中国农业部和其他国有关部门也出台相应的规章制度以控制药物的非法添加和滥用。免疫分析技术具备良好的选择性与特异性,操作简便且价格低廉,可以同时进行大批量的样品检测,在食品安全快速检测市场具有重要意义。本论文主要研究三种饲料中污染和添加物:三聚氰胺、盐酸小檗碱和潮霉素B,制备相应的高亲和力和高灵敏的单克隆抗体,并通过相应抗体建立酶联免疫快速检测方法,研制对应胶体金层析试纸条,用于现场实际样本快速检测。本研究设计和合成了三聚氰胺、盐酸小檗碱和潮霉素B完全抗原,经免疫小鼠、细胞融合、制备腹水、纯化抗体,获得相应的单克隆抗体。三聚氰胺抗体MEL-2H4的亲和力常数为2.288×10~(11)L/mol,抗体亚型为IgG2b,间接竞争酶联免疫吸附实验(ic-ELISA)最优条件下IC_(50)值为1.804 ng/mL,回收率在80%-120%之间;盐酸小檗碱抗体BER-3H10的亲和力常数为8.390×10~(10)L/mol,抗体亚型为IgG2b,ic-ELISA最优条件下IC_(50)值为3.469 ng/mL,回收率在80%-120%之间;潮霉素B抗体HB-1G12的亲和力常数为2.394×10~(10)L/mol,抗体亚型为IgG1,ic-ELISA最优条件下IC_(50)值为9.100ng/mL,回收率在80%-120%之间。基于三聚氰胺单克隆抗体制备了胶体金免疫层析试纸条用于饲料和牛奶样本的检测。该试纸条的添加回收实验结果表明在饲料中的三聚氰胺消线值为100 ng/g,在牛奶中三聚氰胺消线值为10 ng/mL,优于已报道的试纸条灵敏度。基于盐酸小檗碱和潮霉素B单克隆抗体首次制备用于检测饲料样本的胶体金免疫层析试纸条,盐酸小檗碱试纸条的消线值为2.500μg/g,可100 ng/g比色使用,潮霉素B试纸条消线值为250 ng/g,满足市场初筛的需求。
【学位单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S816.1;TS252.7

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