中兽药双黄连注射液鉴伪技术研究

发布时间：2020-09-12 19:33

　　中兽药双黄连注射液是由金银花、黄芩和连翘三味中药材,通过一定的工艺得到的最终灭菌小容量注射液,主要含有绿原酸、黄芩苷和连翘苷等有效成份。兽医临床使用非常广泛,用于预防和治疗畜禽外感风寒所致的上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎和轻型肺炎等。已有研究表明,其发挥上述功用的主要活性成份是：黄芩苷、绿原酸和连翘苷。然而,中兽药双黄连注射液质量标准仅采用高效液相色谱法对其中一种主要活性成份—黄芩苷的含量进行测定,作为产品的质量控制方法。与此同时,一些不良兽药生产企业,为提高所谓“疗效”,进而提高其产品市场占有率,往双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物,以至中兽药双黄连注射液不良反应事件频发。然而迄今为止,对中兽药双黄连注射液中三种有效成份同时检测的方法以及非法添加解热镇痛类药物的筛查与确证方法均鲜见报道。本研究旨在完善双黄连注射液的质量控制,有力打击双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物的情况,切实保障广大养殖户的合法权益及广大人民群众的食品安全,开展了绿原酸、黄芩苷和连翘苷三种有效成份同时检测方法和非法添加解热镇痛类药物的筛查与确认方法研究。1.建立了高效液相色谱法同时测定双黄连注射液中绿原酸、黄芩苷和连翘苷三种主要活性成份的方法。结果表明：绿原酸、黄芩苷和连翘苷在1～200μg/mL浓度范围内线性关系良好(r0.999)；平均加标回收率均大于96%,并对16批次双黄连注射液产品进行实际检测,满足双黄连注射液的符合性检测要求。该方法操作简便、准确、可靠,可用于双黄连注射液的质量控制,也为中兽药双黄连注射液标准限度的确定提供了参考数据。2.建立了高效液相色谱法测定兽用双黄连注射液中非法添加安乃近、对乙酰氨基酚、氨基比林和安替比林等4种解热镇痛类药物的方法。四种解热镇痛类药物用磷酸盐缓冲液(pH值7.0)-甲醇(65：35,V:V)提取与稀释后,经高效液相色谱—二极管阵列检测器检测,保留时间定性,外标法定量。结果显示,四种解热镇痛类药物的浓度在1～100μg/mL范围内的线性良好,相关系数r均为0.9999,回收率在97.8%～100.8%范围内,RSD在0.9%～4.0%之间,检测限1.0 mg/mL。本方法快速、准确,可用于兽用双黄连注射液中非法添加解热镇痛类药物的定性和定量检测。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：S853.7
【部分图文】：

色谱图,色谱图,双黄连注射液,活性成份

浙江大学硕上学位论文逦逡逑果与分析逡逑色谱分离逡逑兽药制剂通常用Ｃ１８色谱柱进行分离，对中兽药双黄连注射液在５逡逑ｌｅｎｔ邋ＺｏｒｂａｘＸＤＢＣｌＳ的保留与分离特性进行了研究。结果表明，当利用０．２％逡逑溶液（Ｖ：Ｖ）与甲醇作用流动相，进行梯度洗脱时，Ｈ种活性成份均实现了逡逑线的有效分离，分离度与理论塔板数均符合要求。对照品溶液色谱图见图逡逑供试品溶液色谱图见图２－２。逡逑ｍＡＵｇ逡逑

显微特征,药材

３．２．１中药原材料的显微特征鉴别逡逑为保证阴性对照的准确有效，本研究通过采购自正规的企业，并经浙江省兽药逡逑饲料监察所陆春波高级兽医师通过外观和显微鉴别为正品，显微图谱见图２－３。逡逑ｔ，ｙ＾ｍｍｍ逡逑ａ．黄岑药材显微特征图逡逑（逡逑Ｉ邋馨？逡逑：邋＇邋．１逡逑．．．；逡逑ｂ．金银花药材显微特征图逡逑媜Ｖ萝逡逑Ｃ．连}撘┎南晕⑻卣鱓逡逑图２－３药材显微特征鉴别逡逑２１逡逑

标准曲线,绿原酸,连翘,标准曲线

取绿原酸、黄《昔和连翅巧对照品适量，用甲醇超声溶解并稀释制成每１邋ｍＬ逡逑中含绿原酸、黄岑巧和连翅昔０．２邋ｍｇ的溶液，摇匀，作为对照品贬备液。分别逡逑取对照品贬备液适量，用５０％甲醇溶液稀释成浓度分别为１、５、２５、５０、１００、逡逑２００邋ｎｇ／ｍＬ的溶液，依照浓度由小到大的次序，按上述色谱条件进样分析，Ｗ系逡逑列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见，２－７；得线性回逡逑归方程，见表２－２。结果表明绿原酸、黄岑昔和连翅昔在１？２００曲ｍＬ范围内线性关系良好。逡逑表２－２绿原酸、黄岑昔和连翅巧线性回归方程逡逑药物名称逦线性回归方程逦相关系数ｒ逡逑绿原酸逦ｙ＝１２．４０６ｘ＋２．２８巧逦１．００００逡逑黄《巧逦ｙ＝３６．巧邋７Ｘ＋１２．Ｕ４逦１．００００逡逑连趣昔逦ｙ＝７．１邋站邋７ｘ＋化．０２９逦０．９９９１逡逑０逦—逦＝逦逦逡逑

【参考文献】