单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)简称单增李斯特菌,是人兽李斯特菌病的致病因子。它可以穿越宿主的肠道屏障、血胎屏障和血脑屏障,从而引起胃肠炎、败血症、脑膜炎、流产等疾病,易感性人群包括免疫功能低下者,老年人,孕妇和新生儿,死亡率可达20~30%。人类感染李斯特菌病常与食用被LM污染的肉类,奶制品等生食或即食食品有关。随着临床上抗菌药物的不规范使用或滥用,许多LM分离株的抗性水平逐渐升高,不断出现对一种或多种抗菌药物耐药的菌株,耐药菌株感染将对该病治疗产生很大影响。目的:对食源性LM污染情况进行调查及耐药性研究,掌握我国新疆地区LM的耐药谱和部分耐药基因,指导抗生素在人类临床和动物饲养中的合理应用,为控制耐药基因的传播提供重要的参考性数据。方法:采用国家标准GB4789.30-2016方法对新疆地区常规送检的1222份食品样品进行LM的分离鉴定。用MIC法及K-B琼脂扩散法,对分离株进行18种抗菌药物敏感性测定;对相关耐药基因进行PCR检测,并对耐药基因进行定位和序列分析;通过LM和肠球菌间的滤膜接合试验,检测LM耐药基因tetM、ermB的水平转移能力。结果:从新疆部分地区1222份食品样品中共分离61株LM,总污染率为4.99%(61/1222)。送检食品中生禽肉、调理肉制品及动物性水产品中受LM污染程度较高,检出率分别为23.07%(18/78),14.39%(19/132)、10%(6/60)。药物敏感性试验显示,29.51%(18/61)的菌株MIC法检测耐药,21.31%(13/61)菌株K-B琼脂扩散法检测耐药,对四环素、链霉素、复方新诺明的耐药菌株高于强力霉素、卡那霉素耐药菌株。MIC法检出的3株氯霉素耐药、2株红霉素耐药以及1株头孢噻吩耐药菌株,K-B纸片法未检出。采用PCR方法对61株LM分离株的部分耐药基因进行检测,结果显示:65%(13/20)表型耐药的菌株检测到相应的耐药基因,四环素类耐药基因以tetM为主,红霉素耐药基因为ermB,氯霉素素耐药基因为cat。在41株非耐药表型菌株中,氨基糖苷类耐药基因aac(6')-Ib-cr和红霉素耐药基因ermB的检出率分别高达53.65%和36.58%。扩增片段核苷酸序列与参考序列同源性为95~100%。耐药基因定位发现tetM,tetA主要存在于染色体DNA中,tetS、cat、ermB主要存在于质粒上,而aac(6')-Ib-cr于染色体和质粒均有分布。2株耐四环素,1株耐红霉素的LM供体与肠球菌进行接合试验,分别获得17、23、28株接合子,接合转移率分别3.4×10~(㧟7)、4.6×10~(㧟7)、5.6×10~(㧟7),接合子ermB或tetM基因检测阳性,其序列与LM的耐药基因序列一致,药敏试验分别出现四环素或红霉素的耐药表型,说明LM的ermB或tetM基因可以通过水平传递给肠球菌。结论:新疆送检食品受到不同程度LM污染,且部分LM出现耐药性,耐药表型与耐药基因携带不完全相符,LM耐药基因tetM和ermB可实现种间水平传播。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.61
【部分图文】：
tetM耐药基因PCR扩增结果
tetA耐药基因PCR扩增结果
tetS耐药基因PCR扩增结果
【参考文献】
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