贵州黄牛Nramp1抗病基因研究

发布时间：2020-09-22 20:57

　　抗病候选基因与畜禽自身的抗病力和免疫力都有相关性,其中天然抗性相关巨噬细胞蛋白1(natural resistant macrophage protein 1,Nramp1)基因就是牛的一个抗病候选基因且较为保守,与抗多种传染病及细胞内寄生虫病的感染有关。但是,该基因在贵州本地牛中是否存在多态性还需要进行探索。因此,本研究通过提取贵州威宁黄牛、关岭黄牛及思南黄牛的血液基因组DNA,采用PCR法扩增Nramp1基因外显子1~6、9~11,并进行测序比对,分析外显子10和11的单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism,SSCP)、统计基因频率及基因型频率,各品种牛所对应基因型的杂合度、有效等位基因数和多态信息含量,同时分析了牛血浆中免疫球蛋白IgG和IgM含量与基因型的关系。进而探索贵州威宁黄牛、关岭黄牛及思南黄牛的Nramp1是否存在多态性及分析其抗病性能。通过研究得到以下结果:1.在PCR扩增贵州威宁黄牛、关岭黄牛与思南黄牛3个地方品种黄牛Nramp1基因的几个外显子中发现,外显子1、3、4、5、6、9与基因库比对不存在变异,其他外显子则存在以下突变:g.700AG(exon2)、g.2046GA(intron3)、g.7155GA(exon10)、g.7400CG(exon11),分别导致氨基酸的突变:Ala9Ala(exon2)、Asp321Asn(exon10)、Pro356Ala(exon11)。2.对3个地方品种黄牛进行exon10 SSCP分析发现,均有两个等位基因A、B,3种等位基因型AA、BB和AB,A为优势等位基因(分别为0.53、0.56及0.64),AB为优势等位基因型(分别为0.61、0.67及0.64),BB基因型频率最低(分别为0.17、0.11及0.05),这3个群体牛均处于中度多态(0.25PIC0.5);exon11的SSCP分析显示,有C、D、E、F 4种等位基因,CC、CD、CE、CF 4种等位基因型,C为优势等位基因(0.83以上),CC为优势等位基因型(0.67以上),其中思南牛只存在CC基因型,即无多态性,关岭牛为低度多态(PIC0.25),威宁牛处于中度多态。3.威宁牛血浆中两种免疫球蛋白的含量显示AA基因型最高。AA基因型的威宁黄牛与思南黄牛与关岭黄牛的两种免疫球蛋白含量依次存在极显著性差异(P0.01)。综上所述:贵州威宁黄牛、关岭黄牛与思南黄牛的exon10呈中度多态,威宁牛的exon11区域亦属中度多态,有较大的选择潜力;且若存在g.7155GA与g.7401CG两种变异时,可能与贵州黄牛的抗病力有关,以威宁牛AA基因型为最佳,其次是AB基因型。
【学位单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S823.81
【部分图文】：

公兔,基因,传染病,细胞内

图 1 Nramp1 基因在 5 只公兔不同组织的表达量Figure 1 Expression of Nramp1 in different tissues of 5 male rabbitsNramp1 基因是一种较为保守的能够天然抵抗多种传染，与动物的结核、布鲁氏菌、沙门氏菌等的抗性有关细胞转化率等部分免疫指标，还会影响动物的泌乳状性能。因的应用明，Nramp1 基因多态性与结核病易感性之间具有相关2016）。因此西北农林科技大学的研究人员（李倩，Nramp1 细胞特异性表达载体；将其线性化后转入新生入该基因的细胞经处理使得该基因插入到染色体相应牛子宫，最终产下健康牛犊；并在随后的试验中证实

琼脂糖凝胶电泳,纯度测定,牛血,条带

组 DNA 提取牛血液基因组 DNA 提取试剂盒说明提样品=1.8，纯的 RNA：A260/A280=2.0，所以对范围应该在 1.8 到 2.0 之间为宜，否则可能，DNA 的浓度和纯度测定实例见附图。 DNA 经 0.7%琼脂糖凝胶电泳，置于凝胶因组 DNA 无拖尾现象，无污染，说明上样量均为 5μl，因此条带的明亮程度与明亮，DNA 的浓度越高，同理，条带越暗

黄牛,基因

图 3.2 黄牛 Nramp1 基因 exon10 扩增图Figure 3.2 Amplification of Nramp1 gene exon10 incattle图 3.3 黄牛 Nramp1 基因 exon11 扩增图Figure 3.3 Amplification of Nramp1 gene exon11 incattle图 3.4 黄牛 Nramp1 基因 exon1～6 的扩增图Figure 3.4Amplification of Nramp1 gene exon1～6in cattle图 3.5 黄牛 Nramp1 基因 exon9～11 的扩增图Figure 3.5Amplification of Nramp1 gene exon9～11 in cattle注：图 3.4 中 M 为 Marker（D2000 分子量标准），泳道 1、2 为 exon1～2（800bp）、泳道 3、4 为 exon3～4（752bp）、泳道 5、6 为 exon5～6（773bp）；图 3.5 中 M 为 D2000 分子量标准，泳道 1、2 为 exon10（231bp）、泳道 3、4 为 exon11（327bp）、泳道 5、6 为 exon9（399bp）、泳道 7、8 为 exon10～11（600bp）。

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