血竭素高氯酸盐对伤口胶原蛋白的调节作用研究

发布时间：2020-09-22 21:35

　　 目的:血竭具有止血生肌的功效,血竭素是从血竭中提取出来的一种黄酮类化合物,由于其以单体形式存在时很不稳定,易被还原,因此常以血竭素高氯酸盐的方式存在。本试验通过血竭素高氯酸盐软膏对伤口及其周围组织应用进行处理,检测胶原蛋白及其相关因子含量变化,探究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin Perchlorate,DP)对胶原蛋白及其相关因子的调节作用。方法:试验选取雄性SD大鼠40只,体重220 g左右。SD大鼠随机分为模型对照组,DP治疗低,中,高剂量组。将大鼠适应性饲养7天,并在第7天禁食12小时。将大鼠按0.35mL/100 g的剂量用10%水合氯醛麻醉,然后将大鼠背部剃毛并用70%酒精消毒。使用直径为1 cm的无菌组织打孔器在每只大鼠背部冲压两个全层皮肤创口,打孔后使用碘酊对创口消毒。待观察大鼠苏醒后,进行常规饲养。用不同浓度的DP软膏处理每组的伤口。低剂量组软膏的DP含量为50μg/mL,中剂量组软膏的DP含量为100μg/mL。高剂量组软膏的DP含量为200μg/mL,模型对照组大鼠未进行处理。使伤口自然愈合。在造模前和造模后第3天,第7天,第10天和第14天取大鼠皮肤的伤口组织。免疫组化法检测大鼠愈合皮肤组织中TGF-β1,MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2的表达和分布。ELISA法检测大鼠愈合皮肤组织中IL-1β,COX-2和PDGF的含量。Western Blot法检测愈合皮肤组织中TGF-β1,Smad2/3,p-Smad2/3,MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2,collagenⅠ和collagenⅢ的表达的变化,RT-PCR法检测愈合皮肤组织中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2,collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA表达量的变化。结果:与模型对照组相比,在0~14 d时,DP软膏可显著提升大鼠愈合皮肤组织中collagenⅠ蛋白及mRNA的表达量,14 d时表达量达到高峰;0~7 d时,DP软膏治疗组collagenⅢ的蛋白及mRNA表达量提高,7 d时表达量达到高峰,collagenⅢ蛋白及mRNA表达水平在7~14d降低,表达水平在14 d时基本恢复正常;在0~14 d时,DP软膏可显著提升大鼠愈合皮肤组织中TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达量,并显著提高Smad2/3蛋白的磷酸化水平;在0~14 d时,DP软膏可显著降低大鼠愈合皮肤组织中IL-1β、COX-2的含量并提高PDGF的含量;0~3d时,DP软膏治疗组MMP-9、TIMP-1蛋白及其mRNA的表达量均显著提高,且在第3 d时表达量达到最大值、MMP-9/TIMP-1的比值也为最大值,3~14 d时MMP-9、TIMP-1蛋白及其mRNA的表达量降低,且MMP-9/TIMP-1的比值亦降低,至14 d时表达量基本恢复至正常水平,且上述作用皆呈现剂量依赖性。在3 d时,DP软膏治疗组MMP-2及TIMP-2蛋白及mRNA的表达量与模型对照组相比变化不显著,但与造模前相比显著提升,在3~14 d时,DP软膏治疗组MMP-2及TIMP-2蛋白及mRNA的表达量与模型对照组相比变化不显著,MMP-2/TIMP-2的比值亦无显著变化。结论:DP能够促进大鼠的伤口愈合。可通过增加愈合皮肤组织中表达的胶原蛋白的量来促进伤口愈合。DP主要是通过增加TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达和Smad2/3蛋白的磷酸化水平促进胶原蛋白的合成,并通过降低MMP-9的表达量及通过调节TIMP-1的表达量抑制MMP-9的活性,从而抑制胶原蛋白的分解,达到促进伤口愈合的作用。
【学位单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S853.74
【部分图文】：

结 果3 结果3.1 血竭素高氯酸盐对皮肤组织中 collagenⅠ和 collagenⅢ的影响检测结果3.1.1 血竭素高氯酸盐对皮肤组织中 collagenⅠ和 collagenⅢ的表达检测结果由 WB 结果可以看出，同一时间点，随血竭素高氯酸盐软膏中血竭素高氯酸盐浓度的增加，collagen Ⅰ及 collagen Ⅲ的表达量显著提高，呈剂量依赖性；而在同一浓度不同时间点观察，发现随着时间的增加，collagen Ⅰ的表达量也有显著提高，呈现时间依赖性。但 collagen Ⅲ的表达量则呈现先上升后下降的趋势，且在 7d 时的表达量最高。见图 3-1 和图 3-2。

图 3-2 DP 软膏对皮肤组织中 collagen Ⅲ蛋白表达的影响Figure 3-2 Effect of DP ointment on the expression of collagen Ⅲprotein in skin tissue3.1.2 血竭素高氯酸盐对皮肤组织中 collagenⅠ和 collagenⅢ基因表达检测结果从 RT-PCR 结果可以看出，随时间增加，皮肤组织中 collagen Ⅰ的 mRNA 表达量显著增加，且给药组中 collagen Ⅰ的 mRNA 表达量极显著高于未给药组；而皮肤组织中 collagen Ⅲ的 mRNA 表达量在 0~7d 时显著上升，但在 7~14d 时则显著降低，7d 时表达量达到最高值，且给药组中 collagen Ⅲ的 mRNA 表达量极显著高于未给药组。见图 3-3。

图 3-2 DP 软膏对皮肤组织中 collagen Ⅲ蛋白表达的影响Figure 3-2 Effect of DP ointment on the expression of collagen Ⅲprotein in skin tissue3.1.2 血竭素高氯酸盐对皮肤组织中 collagenⅠ和 collagenⅢ基因表达检测结果从 RT-PCR 结果可以看出，随时间增加，皮肤组织中 collagen Ⅰ的 mRNA 表达量显著增加，且给药组中 collagen Ⅰ的 mRNA 表达量极显著高于未给药组；而皮肤组织中 collagen Ⅲ的 mRNA 表达量在 0~7d 时显著上升，但在 7~14d 时则显著降低，7d 时表达量达到最高值，且给药组中 collagen Ⅲ的 mRNA 表达量极显著高于未给药组。见图 3-3。

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本文编号：2824949