FMDV感染猪NSP抗体规律及NSP与血清互作蛋白鉴定

发布时间：2020-09-25 11:55

　　 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物烈性传染病。口蹄疫病毒(FMDV)属于小RNA病毒科口疮病毒属,除了主要由病毒蛋白(VP)1至4的结构蛋白(SP)组成的病毒衣壳外,还包括L、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D以及它们的前体等非结构蛋白(NSP)。NSP参与病毒的复制、多聚蛋白的裂解和病毒颗粒的组装过程。动物感染FMDV后,体内既能产生SP抗体,又能产生NSP抗体,而疫苗免疫动物主要诱导机体产生SP抗体,因此OIE推荐以NSP为抗原检测动物体内的NSP抗体区分FMDV感染动物和注射疫苗动物已经得到了广泛认可,最早检测到NSP抗体的时间对于识别感染动物,尽快采取防治措施,有效防控口蹄疫具有举足轻重的意义。NSP可与血清蛋白发生互作反应,互作体也可能是由靶标蛋白调节的底物或分子组分等组成的,识别给定蛋白质的互作蛋白能够提供关于蛋白质功能及其涉及的分子机制的线索。目前,市面上的FMDV诊断试剂盒杂乱,动物感染FMD后免疫球蛋白最早出现时间还不确定,NSP与猪血清互作蛋白还不清楚。本文通过三种不同厂家的试剂盒对人工感染FMDV的猪血清进行NSP抗体IgA、IgM、IgG含量的检测,得出不同免疫球蛋白最早出现时间以及不同时间点的含量变化;以3AB为诱饵蛋白,通过免疫共沉淀联合质谱技术对3AB与FMDV NSP阳性猪血清的互作蛋白进行鉴定,并对其蛋白功能进行了初步分析。结果显示,筛选出最适合FMDV NSP抗体检测的试剂盒A,并发现FMDV NSP IgG最早于第5天出现,IgA、IgM含量在FMDV感染3d后开始逐渐上升。通过免疫共沉淀联合质谱技术鉴定到3AB与FMDV NSP阳性猪血清的互作蛋白有81个,通过GO分析发现他们主要参与了对刺激的应答反应、生物调节、免疫系统反应、调节生物过程、细胞过程等重要生物学过程,集中分布在细胞外区域、细胞器、细胞外区域部分、细胞以及细胞的某一部分,具有结合、结构分子活动、分子功能调节因子、催化反应、信号转导活动等分子功能。通过KEGG Pathway分析,发现筛选出的差异蛋白主要参与金黄色葡萄球菌感染(Staphylococcus aureus infection)、PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)等信号通路。本研究通过人工感染FMDV的猪血清进行NSP抗体,得出不同免疫球蛋白最早出现时间以及不同时间点的含量变化,为进一步研究口蹄疫病毒复制和FMDV NSP抗体最早出现时间提供一定的科学依据。并通过免疫共沉淀联合质谱技术获得了与非结构蛋白互作的蛋白,为FMDV感染生物标识物的发现奠定基础。
【学位单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S852.65
【部分图文】：

图 2-1.A 试剂盒检测感染 FMDV 猪 IgG 抗体Fig.2-1 Kit A detection the FMDV IgG antibody of swine after infected(横坐标为各个实验动物攻毒后不同天数，纵坐标为阻断率，50 以上阳性，50 以下为阴性 ）(The graph's horizontal axis shows the different days after inculcated of each pigs,and the vertical axisshows the blocking rate,when greater than 50 is positive,and less than 50 is negative.)

图 2-1.A 试剂盒检测感染 FMDV 猪 IgG 抗体Fig.2-1 Kit A detection the FMDV IgG antibody of swine after infected(横坐标为各个实验动物攻毒后不同天数，纵坐标为阻断率，50 以上阳性，50 以下为阴性 ）(The graph's horizontal axis shows the different days after inculcated of each pigs,and the vertical axisshows the blocking rate,when greater than 50 is positive,and less than 50 is negative.)

甘肃农业大学 2018 届硕士学位论文 第二章人工感染 FMDV 猪 NSP 抗体测定B 试剂盒所检测到的试验组和对照组的动物血清抗体水平整体变化趋势不及 A试剂盒一致，B 试剂盒所能最早检测到的抗体阳性在第 5d，为 P0067 与 P1473（这与 A 试剂盒一致）及 P1625（图 2-2）。个别动物表现出相反的趋势，这可能与个体差异相关。C 试剂盒所检测到的试验组和对照组的动物血清抗体水平整体变化趋势不及 A试剂盒与 B 试剂盒一致，除对照组外，C 试剂盒只检测到一份样品 P69 为阳性（图2-3），这与 A 试剂盒、B 试剂盒完全不同。

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王燕琴;朱建勇;智宇;;FMDV细胞表面受体研究概述[J];现代农业;2017年12期

2 谷玲军;郭慧琛;郜原;韩世充;孙世琪;杨玉莹;;CD44受体分子对口蹄疫病毒感染的影响[J];中国兽医科学;2016年12期

3 严亨秀;唐冬梅;付丽新;;抗FMDV基因疫苗的研究进展[J];西南民族大学学报(自然科学版);2013年04期

4 杨苏珍;赵冬;郅玉宝;邓瑞广;张改平;;猪O型FMDV主要抗原表位多肽的合成与鉴定[J];西北农业学报;2014年10期

5 高明;邵军军;林彤;赵付荣;刘泽众;常惠芸;吴润;;猪O型FMDV重组多表位抗原基因的克隆表达及免疫学鉴定[J];甘肃农业大学学报;2017年01期

6 FU Yuan-fang;LU Zeng-jun;TIAN Mei-na;ZHANG Xiao-li;LIU Zai-xin;CAI Xue-peng;;Expression of Major B-cell Epitopes within the 2C Non-structural Protein of FMDV and Their Immunoreactivity[J];畜牧兽医学报;2009年S1期

7 ;A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A[J];Virologica Sinica;2011年01期

8 ;Molecular Design and Immunogenicity of a Multiple-epitope FMDV Antigen and DNA Vaccination[J];Chemical Research in Chinese Universities;2008年01期

9 丛国正;周建华;高闪电;独军政;邵军军;林彤;常惠芸;谢庆阁;;携带FMDV前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达[J];生物工程学报;2008年05期

10 安芳兰;刘学荣;董文教;武发菊;葛玉凤;杨惠清;万玉林;杨进才;张云德;殷宏;;FMDV疫苗规模化生产过程中生物反应器参数控制对病毒增殖的影响[J];湖南畜牧兽医;2016年05期

相关会议论文 前10条

1 葛淑敏;金宁一;尹革芬;郑敏;;O型口蹄疫病毒(FMDV)不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

2 Zhang Wei;Zheng Haixue;Ma Junwu;;Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-12 suppresses NF-kB signal transduction for Foot-and-mouth disease virus growth[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年

3 ;Dendritic cell is the potential antigen-presenting cell for the foot-and-mouth disease virus[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会第六届代表大会论文集[C];2006年

4 石玮;;Dendritic cell is the potential antigen-presenting cell for the foot-and-mouth disease virus[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年

5 杨苏珍;;感染动物口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体变化规律[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第二十次学术研讨会论文集[C];2015年

6 安芳兰;刘学荣;董文教;武发菊;葛玉凤;杨惠清;万玉林;杨进才;张云德;殷宏;;FMDV规模化生产过程中生物反应器参数控制对病毒增殖的影响[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年

7 马全英;祝秀梅;刘萍;吕志慧;王凡;刘学荣;黄银君;牟克斌;;口蹄疫病毒感染机制的研究进展[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

8 解银丽;李志勇;张志东;赵付荣;常惠芸;张永光;;O型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年

9 Xian Simei;Li Pengfei;Feng Jiang;Liu Ai;Yang Yu;Liu Zongsheng;;Comparative Study on Three Methods of Molecular Biology for Detecting Orf Virus[A];第七届中国畜牧科技论坛论文集[C];2016年

10 袁为林;宣超莹;段景龙;王继;常枨;杨路达;王蕾;张莎莎;李丽敏;王家鑫;;巨噬细胞清道夫受体识别重组FMDV VP1-VP4蛋白的免疫效应研究[A];中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会论文集[C];2016年

相关重要报纸文章 前1条

1 张永光 研究员;全球口蹄疫疫情警报声声急[N];中国畜牧报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 王燕琴;马甲状腺上皮细胞抗FMDV感染机制研究[D];西北农林科技大学;2016年

2 邵寒娟;A、O型口蹄疫双价疫苗研究[D];厦门大学;2004年

3 马鸣潇;FMDV分子背景分析、病毒拯救及多价基因工程疫苗研究[D];吉林大学;2007年

4 霍晓伟;亚洲1型口蹄疫核酸疫苗与重组鸡痘疫苗的构建及实验免疫研究[D];吉林大学;2008年

5 马海利;O型FMDV复合表位/CTB重组枯草芽孢杆菌构建与实验免疫[D];吉林大学;2008年

6 李勐;FMDV抗原表位多肽及分子佐剂对小鼠上呼吸道免疫的影响[D];东北农业大学;2009年

7 张克山;口蹄疫病毒致乳鼠心肌炎动物模型的建立及其数字基因表达谱分析[D];中国农业科学院;2016年

8 郎需龙;IL-10对口蹄疫病毒感染后免疫调控机理影响的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

9 王洪梅;牛Mx1基因抗口蹄疫病毒作用及其抗病分子机制的研究[D];吉林农业大学;2015年

10 杨延丽;灭活病毒及病毒样颗粒的结构表征和稳定性研究[D];中国科学院研究生院(过程工程研究所);2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 王文莉;FMDV感染猪NSP抗体规律及NSP与血清互作蛋白鉴定[D];甘肃农业大学;2018年

2 罗志宽;FMDV 3A蛋白与ANXA1互作对Ⅰ型干扰素通路的调控[D];甘肃农业大学;2018年

3 张婷;牛鼻咽粘膜及肺泡上皮细胞分离培养、鉴定与FMDV感染研究[D];内蒙古农业大学;2017年

4 谷玲军;CD44对口蹄疫病毒感染的影响[D];长江大学;2017年

5 解银丽;O型FMDV衣壳抗原的耐酸改造及其在昆虫细胞中的表达[D];中国农业科学院;2015年

6 刘泽众;FMDV非结构蛋白抗体化学发光快速检测试剂盒的研发[D];中国农业科学院;2017年

7 高明;几种佐剂对猪O型FMDV重组多表位抗原免疫原性的影响[D];甘肃农业大学;2016年

8 胡文发;纳米微球介导FMDV抗原鼻内免疫诱导的黏膜免疫应答及抗病毒免疫保护效果[D];中国农业科学院;2013年

9 张永胜;大肠杆菌表达的牛亚洲Ⅰ型FMDV多表位重组蛋白的纯化[D];吉林大学;2009年

10 徐海飞;重组牛亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒疫苗的构效研究[D];吉林大学;2007年

本文编号：2826634