盐霉素对于犬乳腺癌细胞系的抗癌作用

发布时间：2020-09-27 18:36

　　研究目的:犬乳腺肿瘤是母犬最常见的肿瘤,其中约50%是恶性的,它是小动物临床重要疾病之一。采用常规肿瘤治疗方法(手术、化疗和放疗或他们的组合)后,高风险乳腺癌患犬仍会死于肿瘤复发和转移。与人类患者一样,肿瘤中存在肿瘤干细胞导致这一临床现象。盐霉素(SAL),是从白色链霉菌(Streptomycesalbus)培养液中提取的聚醚类抗生素,作为抗球虫药广泛的用于经济动物。目前已证明盐霉素可以在体外体内抑制多种人类肿瘤。本研究着眼于盐霉素对犬乳腺癌细胞系及其癌干细胞的抗癌作用。研究方法:1、使用无血清悬浮培养技术从母代细胞CMT7364和CIPp中获得微球体CMT7364S和CIPpS。从CD44+CD24-/low表型,多柔吡星和顺铂的半数致死量IC50,细胞集落形成能力,侵袭能力,β-catenin、CyclinDl、CD44和Oct-4蛋白表达量和异体成瘤能力等方面,分析微球体的特性。2、通过体外试验,评估盐霉素对于CMT7364和CIPp细胞活力、凋亡细胞比例、细胞周期的影响;通过体内试验评估盐霉素对CMT7364异体成瘤、肺部转移及β-catenin和Cyclin D1在肿瘤组织中的表达的影响,研究盐霉素对于犬乳腺癌的抑制作用。3、使用梯度浓度的盐霉素处理CMT7364S和CIPpS,观察盐霉素对细胞活力、CD44+CD24-/loW表型、细胞集落形成能力、侵袭能力、微球体形成能力及β-catenin、CyclinDl及Oct-4蛋白表达量的影响,评估盐霉素对微球体干细胞特性的影响。研究结果:1、微球体CMT7364S和CIPpS具有癌干细胞特性。CMT7364S和CIPpS以CD44+CD24-/low表型细胞为主。与CMT7364和CIPp相比,CMT7364S和CIPpS具有更高的多柔吡星和顺铂IC50,更强细胞集落形成能力、侵袭能力,干细胞标记蛋白CD44、Oct-4及Wnt信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1表达量更高。与CMT7364相比,CMT7364S的异体成瘤能力更强,形成的肺转移灶更多。2、在体外盐霉素对CMT7364和CIPp的增殖抑制呈现时间-剂量依赖性,其作用机制可能与增加CMT7364和CIPp的凋亡细胞比例,及G0/G1期细胞比例有关;在体内霉素可以抑制CMT7364在BALB/c小鼠的生长和肺部转移,降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1的表达在肿瘤组织中的表达。3、盐霉素抑制CMT7364S和CIPpS的癌干细胞能力。CMT7364S与CMT7364及CIPpS与CIPp的盐霉素48 h IC50无差异;暴露于不同浓度的盐霉素可以不同程度的抑制CMT7364S和CIPpS的微球体形、细胞集落形成及侵袭能力。与此同时,盐霉素还可以降低CMT7364S和CIPpS中CD44+ CD24-/loW表型细胞比例,抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和Cyclin D1和干细胞标记CD44和Oct-4的表达。结论:犬乳腺癌细胞中存在犬乳腺癌干细胞。盐霉素通过抑制犬乳腺癌细胞增殖、阻滞细胞周期、增加细胞凋亡、干扰Wnt/β-catenin信号通路、抑制犬乳腺癌细胞侵袭和转移、抑制犬乳腺癌干细胞等多种机制发挥抗癌作用。盐霉素有望成为治疗犬乳腺癌的化疗药物。
【学位单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.292
【部分图文】：

盐霉素,抗肿瘤作用,分子机制,抗肿瘤药物

盐霉素作为新发现的抗肿瘤药物，其抗肿瘤机制仍在研究中。目前发现盐霉素可以通过激活逡逑非正常细胞死亡途径，干扰Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、Ａｋｔ／ＮＦ－ＫＢ等信号通路；增加ＤＮＡ损伤；组织细胞逡逑周期等多种途径抑制肿瘤细胞及肿瘤干细胞（图１－４）邋［Ｉ２Ｎ１２３］。逡逑１０逡逑

细胞,流式细胞技术,比例

在本研究屮，我们通过流式细胞技术分析ＣＭＴ７３６４／ＣＭＴ７３６４Ｓ和ＣＩＰｐ／ＣＩＰｐＳ中ＣＤ４４＋逡逑S80２４－／｜。？细胞比例》图２－２为0＾丁７３６４／0＾丁７３６４５和（：丨？０／（：丨卩０５的00４４－八？（：）g翰４ａS唷炅魇剑]3?细胞图，Ｑ丨为邋ＣＤＡｆ—ＣＤｌｆ邋细胞，Ｑ２邋为邋ＣＤ４４＋ＣＤ２４＋细胞，Ｑ３邋为邋ＣＤｄｔＣＤｌＶ１？细胞，Ｑ４逡逑为邋ＣＤ４４＿／１°Ｗ邋ＣＤＳＶ。＊邋细胞。逡逑Ｓｐｈｅｒｅｓ逦Ａｄｈｅｒｅｎｔｓ逡逑１０５］ｑｉ逦Ｑ２逦！0１逦Ｑ２逦；逡逑１0４；邋０．０２８逦１．３５逦＾０．１５逦０．９７逡逑Ｉ邋ｉ0３ｉ逦ｉ逡逑ｇ…逦ｉ逡逑Ｏ邋ｙ邋■逦Ｈ逡逑ｗ逦１０邋１０４逦浪｝邋Ｑ３邋］Ｑ４邋［Ｘ邋Ｊ邋Ｑ３逡逑ＣＵ逦0邋；０．４１逦９８２逦ｉ邋１．0３逦９７邋９逡逑ｆ＊邋？邋＇！＂■＊逦？邋？邋？？—？ｔ逦－？ｒ＾｜，，，ｒ＂ｔ邋．邋？邋．？—ｔ邋．，？？．．．，逡逑ｒｊ逦１０ｓ邋：Ｑ１逦Ｑ２逦Ｑ１逦Ｑ２逡逑１0４：０＿０３０逦３．５２逦０．０３６逦１．９３逡逑Ｑ．邋１0３］逡逑５邋，0２ｉ＿邋．＇电逦！邋逦．[珏澹咤遑义希唬海海妫悖笩a＾逡逑１０°邋１０１邋１０２邋１０３邋１0４１0５邋１０°邋１０１邋１０２邋１０３邋１０４１０５逡逑ＣＤ４４－ＡＰＣ逡逑图２－２典型的ＣＤ４４－ＡＰＣ邋ＣＤ２４－ＰＥ流式细胞图逡逑Ｆｉｇ．邋２－２邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｆｌｏｗ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ＣＤ４４－八ＰＣ邋ＣＤ２４－ＰＥ逡逑在邋ＣＭＴ７３６４／ＣＭＴ７３６４Ｓ邋及邋ＣＩＰｐ／ＣＩＰｐＳ邋中

细胞,比例,半数致死浓度,多药

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【参考文献】