NAC对镉诱导鸭肾小管上皮细胞损伤的保护效应

发布时间：2020-09-29 18:01

　　 本研究旨在探讨镉对鸭肾小管上皮细胞的氧化损伤及凋亡相关基因的影响,以及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其的保护效应。选用10~15日龄雏鸭进行肾小管上皮细胞的提取与培养,试验分为对照组(Control组)、低镉组(LCd组,细胞培养基中添加1.25μmol/L镉)、中镉组(MCd组,细胞培养基中添加2.5μmol/L镉)、高镉组(HCd组,细胞培养基中添加5μmol/L镉)、NAC对照组(NAC组,细胞培养基中添加100μmol/L NAC)和NAC保护组(Cd+NAC组,细胞培养基中同时添加2.5μmol/L镉和100μmol/L NAC),用硫酸镉(3CdSO_4·8H_2O)在细胞生长78 h进行染毒,染毒12 h后测定以下指标:⑴鸭肾小管上皮细胞的存活率以及形态学的观察;⑵鸭肾小管上皮细胞LDH释放率、细胞内SOD、T-AOC、CAT活性及GSH、MDA的含量;⑶鸭肾小管上皮细胞膜ATP酶(Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase)的活性;⑷凋亡基因Bcl-2、Bak-1和Caspase-3的mRNA表达量。结果表明:1、与对照组相比,染毒各组细胞的存活率显著降低(P0.05或P0.01),染毒组细胞表现核皱缩、细胞核破碎,且与毒物呈剂量-效应关系;2、与对照组相比,染毒各组细胞LDH释放率极显著升高(P0.01);细胞内SOD、T-AOC、CAT活力及GSH含量都极显著下降(P0.01),MDA含量极显著上升(P0.01),且与毒物呈剂量-效应关系;3、与对照组相比,染毒各组细胞的细胞膜Ca~(2+)-ATPase和Na~+/K~+-ATPase酶活性均极显著降低(P0.01),细胞内Bcl-2 mRNA表达量极显著下降(P0.01),Bak-1和Caspase-3 mRNA表达量极显著上升(P0.01),且与毒物呈剂量-效应关系;4、与MCd组相比,NAC保护剂组细胞内的LDH释放率极显著降低(P0.01),细胞膜Ca~(2+)-ATPase和Na~+/K~+-ATPase酶活性、SOD、T-AOC、CAT和GSH活力显著上升(P0.05或P0.01),MDA含量显著下降(P0.05),同时Bcl-2 mRNA表达量显著上升(P0.05),Bak-1和Caspase-3 mRNA表达量显著下降(P0.05)。结论:镉能导致鸭肾小管上皮细胞抗氧化机能下降从而发生氧化损伤,进而引起相关凋亡基因表达量的改变,同时镉对鸭肾小管上皮细胞的损伤作用呈现剂量-效应关系,且NAC对镉导致的细胞氧化损伤有保护作用。
【学位单位】：江西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S859.8
【部分图文】：

Graph Pad Prism5.0 软件对试验数据作图。P<0.05 表示存在显著性差异，P<0.01 表示存在极显著性差异，P>0.05 表示差异不显著。3 结果与分析3.1 肾小管上皮细胞的免疫组化染色结果本实验细胞角蛋白的表达情况如下图 1，阴性对照无表达（图 1A）。上皮细胞角蛋白强烈表达(图 1B)，阳性细胞核周围及细胞浆内不均匀散在分布强度不一的棕黄色颗粒状，呈点状染色。

mRNAmRNA1.00±0.00A0.96±0.03A0.32±0.02Ba0.47±0.07Bb1.00±0.00B1.08±0.09B1.71±0.03Aa1.45±0.14Ab小管上皮细胞形态的影响及 NAC 的保护效应置相差显微镜观察了细胞在镉作用 12 h 后的损伤情 NAC 组细胞，可见细胞紧密相连，呈椭圆状生长且清晰。图 4 为 LCd 组细胞，可见细胞胞体有皱缩状病变不明显。图 5 为 MCd 组细胞，细胞大部分出现核破裂模糊并且大部分细胞出现变皱缩，细胞发亮细胞核破碎甚至消失，细胞严重皱缩，核仁消失，染状，细胞发生严重病理变化。图 7 为 Cd+NAC 组细较 MCd 组细胞，细胞状态更好。从图可以看出随着发生病变损伤程度也随之严重，并且呈现剂量效应用。

细胞紧密生长，结构清晰，未见病理变化 (400urs of cadmium exposure, the cells in the NAC group grew tightlclear, and no pathological changes were observed (400 ×)图 4 染毒 12 h，LCd 组，细胞状态变差，出现空泡 (400 ×urs of cadmium exposure, in the LCd group, the cell state deterioappear (400 ×)

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本文编号：2830068