鸽Mx基因的克隆表达及组织表达谱研究
发布时间：2020-09-29 23:29
Mx蛋白广泛存在于生物体内,是一种由Ⅰ干扰素诱导的动力蛋白GTP酶,具有广谱的抗病毒活性。编码Mx蛋白的基因是由Lindenmann等在研究野生型A2G小鼠上发现的,因能抵抗粘液病毒而命名为Mx(myxovirus resistance)基因。目前,对于Mx基因的研究大多集中在人类、小鼠等哺乳动物上,而对其他动物如家禽的研究相对较少。本研究以鸽为研究对象,采用RT-PCR法成功克隆出了鸽Mx基因全长编码区,并对其进行了生物信息学分析;通过构建真核表达载体,转染293T细胞,并成功在其中进行了表达;采用实时荧光定量PCR技术研究了青年鸽和童鸽Mx基因在不同组织中的表达规律以及不同品种鸽Mx基因在相同组织中的表达规律。主要的研究结果如下:1.鸽Mx基因的克隆及序列分析根据GenBank上公布的鸽基因组序列设计特异性引物,成功克隆出了 Mx基因编码区全长。利用生物信息学等软件分析其序列特征,鸽Mx基因编码区全长2106bp,编码701个氨基酸残基,且具有脊椎动物共有的结构特征。预测其蛋白分子量大小为79.7KD,等电点为6.37。通过与GenBank中已登录的脊椎动物Mx基因序列比对,核昔酸序列的同源性为54.0%-78.0%,氨基酸序列的同源性为41.3%-69.3%。鸽与塞内加尔鳎的核苷酸同源性最低,为54.0%;与鸿雁的核苷酸同源性最高,为78.0%。鸽与绵羊的氨基酸同源性最低,为41.3%;与野鸭的氨基酸同源性最高,为69.3%。2.鸽Mx基因真核表达载体的建立及表达根据克隆得到的Mx基因编码区全长和表达载体序列设计含有酶位点的特异性引物,将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA中,并将构建成功的真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx,转染到 293T细胞中,经 RT-PCR和 Western blot检测后,结果表明,Mx基因能够成功的在293T细胞中表达。真核表达载体pcDNA3.1(-)/myc-hisA-Mx的成功构建和表达,为Mx蛋白生物学功能的进一步研究提供了坚实的基础和保障。3.鸽Mx基因在不同组织中的表达规律采用实时荧光定量PCR技术研究了鸽Mx基因在不同组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、小肠、肌肉)中的相对表达量。结果发现:鸽Mx基因在青年鸽和童鸽中,在心脏和肌肉中几乎不表达,在胰脏和脾脏中表达量较高;深王鸽和卡奴鸽在相同组织中的表达情况为两种鸽的Mx基因在心脏、肝脏、肺脏、肾脏、胰脏以及肌肉组织中其表达量均无显著性差异,只有脾脏和小肠的表达存在显著性差异,其中深王鸽脾脏Mx基因表达量极显著(p0.01)高于卡奴鸽脾脏表达量,而卡奴鸽的小肠Mx基因的表达量显著(p0.05)高于深王鸽小肠表达量。
【学位单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S836
【部分图文】：
逡逑将提取的鸽成纤维细胞总ＲＮＡ进行电泳检测如图２－１，可在２８Ｓ和１８Ｓ处逡逑看到条带清晰，亮度比约为２：１的两条条带，用紫外分光光度计检测ＲＮＡ的纯逡逑度，其Ａ２６０／Ａ２８０＝１．８－２．０，说明提取的总ＲＮＡ完整性较好，无降解，可用于下逡逑一步实验。逡逑灄：，１ＳＳ逡逑图２－１鸽成纤}赴埽遥危恋缬就煎义希疲椋珏澹玻卞澹裕铮簦幔戾澹遥危铃澹澹欤澹悖簦颍铮穑瑁铮颍澹螅椋箦澹铮驽澹穑椋纾澹铮铄澹妫椋猓颍铮猓欤幔螅簦箦义希玻哺耄停颍遥危恋模遥裕校茫依┰鲥义嫌茫校铮欤ǎ桑海茫┯盏几氤上宋赴崛∠赴艿模遥危粒煤铣傻奶匾煨砸镥义辖校遥裕校茫遥┰霾锞保デ碇悄旱缬竞螅谠迹玻保埃洞τ幸幻髁恋睦┰鲥义咸醮ㄍ迹玻玻朐て诘哪康奶醮笮∠喾ｅ义希卞澹插澹桑郑卞义稀鰹靛义现
本文编号：2830417
【学位单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S836
【部分图文】：
逡逑将提取的鸽成纤维细胞总ＲＮＡ进行电泳检测如图２－１，可在２８Ｓ和１８Ｓ处逡逑看到条带清晰，亮度比约为２：１的两条条带，用紫外分光光度计检测ＲＮＡ的纯逡逑度，其Ａ２６０／Ａ２８０＝１．８－２．０，说明提取的总ＲＮＡ完整性较好，无降解，可用于下逡逑一步实验。逡逑灄：，１ＳＳ逡逑图２－１鸽成纤}赴埽遥危恋缬就煎义希疲椋珏澹玻卞澹裕铮簦幔戾澹遥危铃澹澹欤澹悖簦颍铮穑瑁铮颍澹螅椋箦澹铮驽澹穑椋纾澹铮铄澹妫椋猓颍铮猓欤幔螅簦箦义希玻哺耄停颍遥危恋模遥裕校茫依┰鲥义嫌茫校铮欤ǎ桑海茫┯盏几氤上宋赴崛∠赴艿模遥危粒煤铣傻奶匾煨砸镥义辖校遥裕校茫遥┰霾锞保デ碇悄旱缬竞螅谠迹玻保埃洞τ幸幻髁恋睦┰鲥义咸醮ㄍ迹玻玻朐て诘哪康奶醮笮∠喾ｅ义希卞澹插澹桑郑卞义稀鰹靛义现
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