芦荟胶治疗Ⅰ型糖尿病犬皮肤创伤的临床效果观察

发布时间：2020-10-10 04:28

　　 创伤是兽医临床上常见病例,糖尿病是影响创伤愈合的重要因素之一,血糖升高将引起伤口周围细胞代谢异常以及血管发生狭窄和闭塞,同时也会导致自身免疫力下降。芦荟胶具有抑菌消炎、免疫调节、镇痛以及促进肉芽组织生成等作用,能有效促进创伤愈合。本研究的目的就是探讨芦荟凝胶在糖尿病犬皮肤创伤愈合过程中的作用,并初步探究芦荟凝胶是通过哪些指标来影响创伤愈合速率,为今后临床治疗糖尿病动物创伤愈合提供新思路。6只大型中华田园犬适应性饲养两周后,先建立糖尿病模型后建立创伤模型。在犬背作16个创口(用直径约为15 mm的自制打孔器作皮肤全层切除),从左到右每列分别为空白对照组(K组)、凡士林组(F组)、芦荟胶组(L组)和橡皮生肌膏组(X组)。每天同一时间给药且每周称一次体重;术后第0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d拍照记录愈合情况;用ImageJ软件计算3 d、7 d、14 d、21 d的创面愈合率、创伤愈合时间及愈合后瘢痕面积;于第7 d、14 d、21 d、28 d取皮肤组织样本进行HE染色及Masson染色;ELISA试剂盒测定组织匀浆中白细胞介素1-β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)四种炎性因子的含量;提取组织RNA并用RT-PCR检测创面愈合相关因子血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)和血小板衍生因子(Platelet Derived Growth Factor,PDGF)的含量。实验结果:糖尿病模型及创伤模型建立成功。3周后糖尿病犬的体重呈下降趋势。肉眼观察与K组相比L组和X组可较快生成肉芽组织及上皮,结痂脱落及瘢痕组织形成时间均减少。与K组相比,创面愈合率随时间而增加,7 d及14 d时L组和X组差异极显著(P0.01),21 d时仅X组差异显著(P0.05);创面愈合时间L组和X组差异极显著(P0.01);愈合后瘢痕面积L组差异显著(P0.05),X组差异极显著(P0.01)。皮肤匀浆中的IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β整体含量逐渐下降,组间含量也逐渐降低。与K组相比,IL-1β在7 d时L组差异显著(P0.05),X组差异极显著(P0.01);14 d时L组差异显著(P0.05),X组差异极显著(P0.01);21 d时仅有L组差异显著(P0.05)。IL-6在7 d时L组和X组差异极显著(P0.01);14 d时L组和X组差异显著(P0.05)。TNF-α在7 d时L组和X组差异显著(P0.05);14 d时L组和X组差异极显著(P0.01)。TGF-β在7 d时L组和X组差异显著(P0.05);14 d时L组差异显著(P0.05),X组差异极显著(P0.01)。HE染色结果显示7 d时四组创面均有大量炎性细胞浸润,少量肉芽组织覆盖以及血管组织新生,但L组和X组的炎症细胞密度比K组和F组小。14 d时四组创面有少量上皮细胞覆盖,与K组和F组相比,L组和X组炎症细胞较少但新生血管数量较多,并伴有少量成纤维细胞和胶原纤维生成。21 d时四组可见大量成熟肉芽组织,K组和F组仍有少量的炎症细胞浸润,L组和X组创缘组织完全上皮化,成纤维细胞与胶原纤维较多。28 d时四组均见成熟肉芽组织,L组和X组有表皮和皮脂腺再生,而K组和F组未发现。Masson染色结果显示四组创面胶原纤维随治疗时间延长而增多。7 d和14 d时L组和X组的胶原纤维生成量比K组和F组多,14 d时L组和X组的胶原纤维分布均匀且排列相对整齐,而K组和F组的胶原纤维排列不规则,卷曲成团。21 d和28 d时K组和F组胶原纤维排列仍处于混乱状态,而L组和X组胶原纤维的染色特性和排列方式更接近正常皮肤组织。PDGF和VEGF基因的表达量整体呈下降趋势,但组间呈上升趋势。PDGF基因表达量与K组相比,7 d时,L组有显著差异(P0.05),X组有极显著差异(P0.01);14 d时,L组和X组有显著差异(P0.05);21 d时,只有X组有显著差异(P0.05)。VEGF基因的表达量与K组相比,7 d时,L组有显著差异(P0.05),X组有极显著差异(P0.01);14 d时,L组和X组有显著差异(P0.05)。实验结果表明:芦荟凝胶在糖尿病犬的创伤愈合过程中能加快创面愈合速率,缩短创面愈合时间,减少愈合后瘢痕面积,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β等炎症因子的分泌,刺激VEGF和PDGF等创伤愈合相关细胞因子的表达,从而达到加快创伤愈合的目的。
【学位单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.292
【部分图文】：

图 2-1 创伤模型的制备Fig.2-1 Preparation of wound model面愈合的临床指标床一般观察术后第 0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d，肉眼观察创面愈合情况，有无渗出物以及肉芽组织生长等情况并拍照。伤愈合率术后第 0 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 观察创面愈合情况并在同一时间件计算出创面愈合率。创面愈合率的计算是用原始创面面积减去未愈合的始创面面积乘以 100%。面愈合时间犬进行长期观察，并记录创面愈合时间。本实验中创面愈合以创面被肉芽准，达到愈合标准的时间即为创面愈合时间。合后创面瘢痕面积

.1 糖尿病造模前后犬血糖及体重的变化犬正常血糖值为空腹 3.3-6.7 mmol/l，餐后 3.6-7.7 mmol/l，连续 3 d于早上空腹、餐后晚 8 时监测犬的血糖，结果见表 3-1。在任一时间点，所有犬的血糖值均处于正常范围高血糖或低血糖等异常情况。表 3-1 糖尿病模型前犬血糖值Tab. 3-1 The blood glucose level of canines before diabetes model间/编号 1 2 3 4 5 6空腹 4.43±0.404 4.23±0.751 3.70±0.300 3.53±0.322 3.77±0.153 4.23±0.2餐后 5.23±0.651 4.53±0.723 3.97±0.116 4.10±0.100 4.17±0.569 4.47±0.1晚 8 时 4.93±0.208 4.07±0.058 3.37±0.322 3.97±0.503 3.80±0.625 4.23±0.3有学者表明若注射四氧嘧啶 48 h后随机血糖≥11.1 mmol/L，且持续两周血糖均维持在平以上，则证明糖尿病犬造模成功。因此分别于注射四氧嘧啶前 0.5 h和 0.5 h、2 h、4、8 h、10 h、12 h、1 d、1.5 d、2 d、2.5 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d监测血糖，结果见表 3-2。糖尿病模型犬在 2 h后血糖急剧升高且维持在 14 mmol/L以上，明于对照组。

图 3-3 各时间段创面愈合情况临床观察Fig. 3-3 Clinical observation of wound healing in each period3.2.2 芦荟胶对创面愈合率影响实验结果分别于术后 3 d、7 d、14 d、21 d 测量各实验组犬的创伤面积，然后计算出平均创合率总体来看实验犬创面愈合率随着天数的增长均逐渐增加。第 3 d 时，虽然芦荟胶组皮生肌膏组的平均愈合率比空白对照组及凡士林组的愈合率高，但经分析后结果并没有性差异；第 7 d 及第 14 d 时，与空白对照组相比，芦荟胶组和橡皮生肌膏组的愈合率显加，呈极显著增加（P<0.01），凡士林组无显著差异；第 21 d 时，芦荟胶组和橡皮生肌已基本愈合，与空白对照组相比，橡皮生肌膏组创面愈合率显著增加（P<0.05），凡士林芦荟胶组无显著差异。结果见表 3-2 和图 3-4。表 3-2 创面平均愈合率（%）Tab. 3-2 Average wound healing rate (%)组别/时间 3 d 7 d 14 d 21 d空白对照组 2.573±0.518 10.610±0.956 47.500±3.631 89.313±1.5凡士林组 2.140±0.260 14.310±3.994 52.480±1.770 88.397±3.2芦荟胶组 8.447±1.130 26.480±5.134** 72.397±2.625** 94.347±2.0

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本文编号：2834728