麝香酮干预p53-p21及凋亡信号通路基因表达谱的研究

发布时间：2020-10-11 12:34

　　 麝香酮是天然麝香和麝鼠香的主要功能成分,有特殊香味,具有一定的药理活性,对中枢神经系统、呼吸和循环系统也有一定的影响。麝香酮对动物的条件反应有影响,且随剂量而改变。p53基因在机体组织细胞的生长、发育与分化等过程中起重要作用。其主要生物学功能是维持细胞基因组的稳定,负责调节细胞的生长和诱导细胞的凋亡。激活的p53可以抑制细胞转化,诱导细胞生长停滞、细胞凋亡,启动DNA损伤修复。本研究通过在培养细胞过程中加入不同剂量的麝香酮进行干预实验,通过荧光定量PCR技术检测p53介导的重要细胞周期和凋亡通路相关基因的表达,探讨其不同剂量对这些基因mRNA表达的影响规律,从而了解其对细胞的影响。本实验使用HEK293T细胞,将复苏后传至第3代的细胞分为9组,分别为添加1μg/ml麝香酮组、5μg/ml麝香酮组、10μg/ml麝香酮组、15μg/ml麝香酮组、20μg/ml麝香酮组、25μg/ml麝香酮组、30μg/ml麝香酮组、0.1%DMSO对照组和空白对照组,并记为T1、T5、T10、T15、T20、T25、T30、TDM和TK。每组设置3个生物学重复。与0.1%DMSO对照组比较,统计分析p53、有关细胞周期的p21、RPRM、GTSE1、CCND1、CDK4、CCNE1、CDK2、CCNB1 和 CDK1 基因与有关细胞凋亡的 BCL2、BCL2L2、BAX、BID、FAS、CASP3、CASP8、CASP9、TNFRSF10B 和 APAF1 基因的转录水平的变化。结果显示,T1、T5、T10、T15、T20、T25和T30实验组p53基因的转录水平分别为TDM对照组的1.05倍、0.93倍、1.1倍、1.39倍、1.49倍、1.68倍和1.84倍。麝香酮对细胞的作用随着剂量的改变而改变,低浓度(1μg/ml～1 0μg/ml)促进细胞生长抗凋亡,高浓度(15μg/m1～30μg/ml)抑制细胞生长甚至促使细胞凋亡。麝香酮对p53基因介导的细胞周期和细胞凋亡调节过程中的重要基因如p21基因、CDK基因、BCL2基因和CASP3基因等的转录水平造成影响,低浓度下促进细胞生长的相关基因表达上调,高浓度下凋亡相关基因表达上调,表达差异显著(P0.05)。
【学位单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S859.7
【部分图文】：

密相连成单层膜，随着细胞增殖数量增多，细胞之间常出现所谓拉网现象，即在构成上??皮膜状生长的细胞群中一些细胞常相互分离卷曲，致使上皮细胞膜中形成网眼状空洞。??每隔２４小时对快速生长的细胞进行观察，结果见图３－１。??通过观察细胞可以发现，加入ＤＭＳＯ的对照实验组与空白对照组细胞生长状态与??趋势并无太大差别，在加入不同剂量的麝香酮２４小时之后，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０实验组较对??照组生长趋势相差不大，Ｔ１５和Ｔ２０实验组较对照组生长趋势稍慢，Ｔ２５与Ｔ３０实验组??较对照组细胞生长趋势明显缓慢；在４８小时后，各组细胞继续处于生长的状态，数量??较２４小时前明显增多，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０实验组正常快速生长，表观观察的生长趋势与对??照组无太大差别，Ｔ１５和Ｔ２０实验组生长速度稍慢，生长趋势与对照组有一点差距，??Ｔ２５和Ｔ３０实验组生长较慢，细胞数量与对照组相差很大；在细胞生长７２小时后，??Ｔｌ、Ｔ５、Ｔ１０实验组与对照组细胞几乎长满了整个培养瓶

密相连成单层膜，随着细胞增殖数量增多，细胞之间常出现所谓拉网现象，即在构成上??皮膜状生长的细胞群中一些细胞常相互分离卷曲，致使上皮细胞膜中形成网眼状空洞。??每隔２４小时对快速生长的细胞进行观察，结果见图３－１。??通过观察细胞可以发现，加入ＤＭＳＯ的对照实验组与空白对照组细胞生长状态与??趋势并无太大差别，在加入不同剂量的麝香酮２４小时之后，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０实验组较对??照组生长趋势相差不大，Ｔ１５和Ｔ２０实验组较对照组生长趋势稍慢，Ｔ２５与Ｔ３０实验组??较对照组细胞生长趋势明显缓慢；在４８小时后，各组细胞继续处于生长的状态，数量??较２４小时前明显增多，Ｔｌ、Ｔ５和Ｔ１０实验组正常快速生长，表观观察的生长趋势与对??照组无太大差别，Ｔ１５和Ｔ２０实验组生长速度稍慢，生长趋势与对照组有一点差距，??Ｔ２５和Ｔ３０实验组生长较慢，细胞数量与对照组相差很大；在细胞生长７２小时后，??Ｔｌ、Ｔ５、Ｔ１０实验组与对照组细胞几乎长满了整个培养瓶

／ＣＤＫ２—Ｇ１?ａｒｒｅｓｔ；?ｐ５３—＞ＲＰＲＭ?（?Ｒｅｐｒｉｍｏ?）?／ＧＴＳＥ１?（?Ｂ９９?）?＼ＣＣＮＢ１?（?ｃｙｃｌｉｎ－Ｂ?）??／ＣＤＫ１?（Ｃｄｃ２）?—Ｇ２?ａｒｒｅｓｔ。按照２，２．３．２和２．２．３．３的实验方法对其进行荧光定量??ＰＣＲ，扩增曲线（以ｐ５３为例）见图３－２，各个引物特异性良好，熔解曲线见图３－３。取??３组ＣＴ值得其平均值，通过相对表达量差异公式计算得出每个基因在不同麝香酮含量??干预的细胞中的表达量。??Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ａ??０?１０?２０?３０?ＡＱ??Ｃｙｃｌｅｓ??图３－２扩增曲线??Ｆｉｇ?３－２?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ??ＩＭＨＭ＊??，－咖?八?￣ｈ?二?ｐ?Ａ?二卜５＇?Ａ??－—?丨?＼?＇?ｒ－—＇￣＇?＼?ｚ?—一?—Ｉ?＼—??ｕ?ｒ．?Ｋ?＞１?ｒ．?Ｍ?■＞?？?ｕ?ｒ．?？?ｔ＊?？５?Ｍ?？?？?；？－＞：？?Ｋ?Ｈ?？?ｗ??Ｉ?ａｗｇｏｕｍｗ．?Ｏｌｗ??ａＭｆＭ?ｉｍａｍ＊??觀籠編函??？ＭＷ＊?ＩＭＰＶ４＊??获「丨麵??ｌＭｗ＊ａｉａ？？，ＣＭ？Ｍ?Ｔｗｅｅｅｗｗｅ．?＃浚浚???ｉｗｒｗｅｗｅ．Ｃｅｍｖｉ?Ｉ？ａ４?
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本文编号：2836598