获能和低温获能间AI的泛素化与类泛素化修饰的研究

发布时间：2020-10-12 05:31

　　 获能赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带(ZP)相互作用,进而完成受精过程。获能和低温获能之间有许多相似之处,有研究表明精子获能期间蛋白磷酸化是一个非常重要的事件,获能可能受到泛素-蛋白酶体系统(UPS)的调节,并有研究指出类泛素(SUMO)化与磷酸化和泛素(Ub)化相关联。因此,本试验主要的目的是探究获能与低温获能的猪精子中顶体酶抑制剂(AI)的泛素(Ub)化和类泛素(SUMO)化的修饰水平差异,更加深入地了解猪精子获能过程中蛋白质的修饰与降解机制,为改善猪精子冻融后的质量提供依据。本试验选用杜洛克公猪精液,分为新鲜精液(对照组)、获能处理、诱导顶体反应处理、低温获能处理四个试验组。通过微生物动(静)态图像检测系统(CASA)、SDS-PAGE和蛋白免疫印迹(Western blot)等方法进行检测,每组试验重复5次。试验结果表明:1.获能处理、诱导顶体反应处理、低温获能处理三个处理组的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著高于对照组(P0.05);2.获能处理、诱导顶体反应处理、低温获能处理三个处理组精子的AI表达量显著低于对照组(P0.05);3.获能和诱导顶体反应处理组精子的泛素化水平显著高于对照组(P0.05),添加E2抑制剂后的精子均未发生磷酸化;4.获能和诱导顶体反应处理组精子的类泛素化水平显著高于对照组(P0.05),日成上升趋势,随着2-D08抑制剂浓度的增加,各组精子的蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐降低且均低于对照组。本研究得出的结论是:1.公猪精子获能伴随着精蛋白酪氨酸磷酸化水平的上升、泛素化与类泛素化修饰的增强,和顶体酶抑制剂的降解;2.体外抑制泛素化或类泛素化阻碍了公猪精子获能；3.泛素化和类泛素化修饰可能作为公猪精子能的标志物。
【学位单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S814
【部分图文】：

新蛛粘子?获能处理?诱导顶休反应处理低温获能处理??图３－２．四种不同处理的猪精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的条带灰度似??纵坐代表灰度似，横坐标代表四种不同处理，从左到冇依次为新鲜精液、??获能处理的精子（３?ｈ）、诱导顶体反应处理的精子（ＣＶ’载体）、低温获能处理??的精子（４°Ｃ）。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－２．?Ｇｒｅｙ?ｖａｌｕｅｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｉｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ｈｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??Ｔｈｅ?ｏｒｄｉｎａｔｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｇｒａｙ?ｖａｌｕｅ，?ｔｈｅ?ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ?ａｘｉｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ，?ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｌｉｔ：ｌ：ｒｃｓｈ?ｓｅｍｅｎ，?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（?３?ｈ?），?Ａｃｒｏｓｏｍｃ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃ＇ａ：，ｃａｒｒｉｅｒ）ｔ?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４?Ｃ）？??２７??

?３?４??图３－１．四种不同处理的猪精子蛋ｆｔ酪氨酸磷酸化水平的免疫印迹??条带从左到右依次为：１．新鲜精液、２．获能处理的精子（３?ｈ）、３．诱导顶体??反应处理的精子（Ｃａ２４载体）、４．低温获能处理的精子（４°Ｃ）。ＧＡＰＤＨ为内参。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｙｒｏｓｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｂｏａｒ?ｓｐｅｒｍ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??Ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ?ｒｉｇｈｔ：?１?？?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ、２．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（３?ｈ）、３．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ?（Ｃａ２＋ｃａｒｒｉｅｒ）、４．?Ｃｒｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉｖｅ?ｓｐｅｒｍ?（４°Ｃ）．?ＧＡＰＤＨ?ｉｓ?ｔｈｅ?ｉｎｔｅｒｎａｌ??ｐａｒａｍｅｔｅｒ．??〇７个??ｏ．６?Ｉ－?ａ??Ｉ?丄??ｍ??Ｉ?＾??？?圍．??新蛛粘子?获能处理?诱导顶休反应处理低温获能处理??图３－２．四种不同处理的猪精子蛋｜＇｜酪氨酸磷酸化水平的条带灰度似??纵坐代表灰度似

．．．．．「??图３－４．四种不同处理的猪精子顶体膜完整性的检测结果。??Ａ．新鲜精液，浓度调整到４Ｘ１０１‘精子／ｍＬ；?获能精子，通过获能液处理，诱导??精子发屮获能现象；Ｃ．顶体反应精子，通过钙离子载体，诱导获能的精子发屮顶??体反应；Ｉ）．低温获能精子，通过低温处理，诱导精子发小冷休克现象。??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４．?Ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ａｃｒｏｓｏｍａｌ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．??Ａ．?Ｆｒｅｓｈ?ｓｅｍｅｎ?ａｎｄ?ａｄｊｕｓｔ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｔｏ?４?Ｘ?１?（）（）?ｓｐｅｒｍ?／ｍＬ；?Ｂ．?Ｃａｐａｃｉｔｉｖｅ??ｓｐｅｒｍ，?ｓｐｅｒｍ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｗｉｔｈ?ｃａｐａｃｉｔａｔｉｏｎ?ｉｌｕｉｄ；?Ｃ．?Ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??ｓｐｅｒｍ，?ｔｈｅ?ａｃｒｏｓｏｍｅ?ｒｅａｃｔｉｏｎ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｉｏｎ?ｃａｒｒｉｅｒ；?Ｄ．?Ｃｉ＊ｙｏ－ｃａｐａｃｉｔａｔｉ＼ｃ??ｓｐｅｒｍ，?ｃｏｌｄ?ｓｈｏｃｋ?ｗａｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｌｏｗ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．??２９??
【参考文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 胡启蒙;梅山猪和杜洛克猪精子活力和蛋白磷酸化比较研究[D];上海交通大学;2014年

本文编号：2837712