鸭疫里默氏杆菌RA-GD株RecA基因的功能研究

发布时间：2020-10-14 17:59

　　 鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种无鞭毛、无芽孢,瑞氏染色呈两极着色的革兰氏阴性菌。该菌感染家鸭后,引起的传染病称为鸭传染性浆膜炎,以纤维素性心包炎等广泛性纤维素性炎症为临床病理特征。该病在世界各地广泛分布,具有较高的发病率和死亡率,是造成养鸭业重大损失的主要传染病之一。细菌DNA损伤诱导反应又称为SOS反应,是指细菌应对基因组DNA损伤的重要保护机制。RecA/LexA蛋白在很多细菌的SOS反应诱导中起关键调控作用。研究清楚RecA基因的功能及其可能在DNA损伤修复反应(SOS应答)中发挥的作用,有助于理解减弱细菌毒力和进化,降低细菌致病性,同时有助于降低并控制日益严峻的细菌耐药性,以及为开发新型抗菌小分子及生物制剂,减少化学药物的使用以控制病原菌方面发挥着一定作用。首先在同源重组的基础上,通过改造后的自杀性质粒PRE112-RecA-Erm构建缺失株RA-GD?RecA。在缺失株的基础上,通过对回复质粒PCP29逐步引入多克隆位点(Mcs)、复制区(Ori)、启动子(Psr)和RecA基因序列,构建成功回复质粒Pcp29-Mcs-Ori-Psr-RecA,与亲本株RA-GD通过接合转移构建回复株cRA-GD?RecA。其次,对上述3种鸭疫里默氏杆菌(亲本株RA-GD、缺失株RA-GD?RecA和回补株cRA-GD?RecA)分别开展生长曲线、药敏试验、雏鸭毒力试验等生物学特性研究。结果表明,RecA基因并不影响鸭疫里默氏杆菌RA-GD株的生长速率;RecA基因在降低鸭疫里默氏杆菌对硫酸庆大霉素的敏感性方面发挥作用;与RA-GD相比,RecA基因的缺失显著降低了RA-GD?RecA对雏鸭的致死率,表明RecA基因可能参与影响并减弱了鸭疫里默氏杆菌毒力因子的表达。最后,比较亲本株RA-GD和回复株cRA-GD?RecA在UV损伤前后,细菌存活数、RecA基因的转录和蛋白表达水平。结果表明,在一定限度内,RecA基因的转录水平随UV辐照时间的延长而增加。在UV引起的DNA损伤试验中,UV因素可以引发细菌发生DNA损伤应答(SOS应答),表明RecA基因可能在鸭疫里默氏杆菌RA-GD株的SOS应答中发挥正调控作用。亲本株RA-GD与回复株cRA-GD?RecA的Western blotting证实,RecA蛋白反应原性良好,但UV因素并不参与影响RecA蛋白水平的表达。
【学位单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.61
【部分图文】：

反之，宿主细胞中的细菌病原体会引起，由于慢性炎症和/或基因毒素和 DNA 修复 (Arthur et al., 2012)。 SOS 应答对抗菌药物诱导产生的 DNA 损伤进行修复，修复突变的基因，的形成。抑制细菌 SOS 反应，细菌基因组更容易突变，增加了出现耐药性 SOS 反应可以通过突变和促进基因水平转移来引入耐药性，理论上也可以耐药性。因此，在目前耐药性广泛分布现状下，如何有效利用细菌 SOS 反既能增强现有抗菌药物效果，减少耐药性发生，又能消除现有细菌耐药性因此，了解抗菌药物存在时细菌是如何诱导 SOS 反应的？诱导的 SOS 反、转移的机制是什么？了解这种进化机制可能更有利于我们认识和控制细究的目的和意义Bank 数据库发表的 RA 全基因组序列证实(Yuan et al., 2011)，RecA 基因在守。经与大肠杆菌 RecA 基因序列比对，同源性为 59.8%，同源性较高。菌与大肠杆菌表达 RecA 蛋白的氨基酸序列，相似性为 61.11%。序列对比

图 1.3 鸭疫里默氏杆菌 RecA 蛋白的三维构象预测ree-dimensional conformational prediction of RecA protein因的功能及其可能在 DNA 损伤修复反应（SOS和进化，降低细菌致病性，同时有助于降低并控分子及生物制剂，减少化学药物的使用以控制默氏杆菌（RA-GD 株）RecA 基因的功能。 RA 中 RecA 基因功能的相关报道。基于以上因能研究。

Fig. 2.2 Schematic diagram of the one-step rapid cloning kit reaction p化线性化载体获得断扩增引物设计引物设计（5’-3’）：线性化载体正向 15-25nt 重叠序列+目的片25nt）引物设计（5’-3’）：线性化载体正向 15-25nt 重叠序列+目的片25nt）如下：A 重组 F（含 pstⅠ和 sphⅠ酶切位点序列）：ACAAAGGAAAACAGAAATGCTGCAGATGGCAAAGACTGAA 重组 R（含 pstⅠ和 sphⅠ酶切位点序列）：ATGATTACGCCAAGCTTGCATGCCTATTTAGCTTGTAATTTT图 2.2 一步法快速克隆试剂盒反应原理示意图
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本文编号：2840991