新疆部分地区绵羊无形体分子流行病学调查及感染特征研究

发布时间：2020-10-19 15:06

　　人粒细胞无形体病(human granulocytic anaplasmosis,HGA)是由嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,AP)侵染人末梢血中性粒细胞引起的一类人畜共患病,属于自然疫源性疾病。蜱虫是本病的主要传播媒介,如全沟硬蜱、森林革蜱、肩突硬蜱、太平洋硬蜱等。HGA主要是通过蜱虫叮咬感染不同的宿主动物进行传播,该病原体宿主广泛,可以感染人、家畜、鼠类和各种野生动物,各种野生动物的持续感染是维持本病在自然界中长期存在的重要条件。近年来国内外报道人和各种动物感染嗜吞噬细胞无形体的病例越来越多,我国也陆续从多种动物,蜱和人的体内检测到嗜吞噬细胞无形体,说明无形体病的感染数量和分布范围在逐步扩大。新疆地处亚欧大陆腹地,地域广阔,生态环境多样,绵羊养殖是新疆传统畜牧业,绵羊与各种蜱和鼠类的活动接触密切,极大的增加了人和动物被粒细胞无形体感染的风险。我们对新疆天山北麓不同地区品种绵羊感染无形体进行分子流行病学调查,病原形态学观察与动物感染实验,确定不同品种绵羊无形体的感染率,病原遗传特征与致病性,为养殖业的健康发展保驾护航。主要的研究方法和结果如下:(1)新疆不同地区三个品种绵羊无形体流行病学调查:采集新疆伊犁哈萨克自治州尼勒克县木斯乡哈萨克羊血样300份,玛纳斯湖羊血样300份,玛纳斯广东地乡萨福克绵羊血样300份,通过巢氏PCR检测无形体16sRNA,结果显示,伊犁哈萨克羊无形体的阳性率为28%,玛纳斯湖羊无形体阳性率为18%,玛纳斯萨福克羊无形体的阳性率为24%,总体感染率为23.3%。其中伊犁尼勒克县木斯乡哈萨克羊感染率最高,玛纳斯县湖羊感染率最低。(2)新疆绵羊无形体16sRNA遗传进化分析:随机挑选30个阳性样本,针对无形体16sRNA特异性引物进行扩增,测序后选取5条差异序列进行遗传进化树分析,将这些序列分别命名为Sheep1,Sheep2,Sheep3,Sheep4,Sheep5。用DNAstar将以上基因序列与在GenBank中国内外典型无形体序列进行比对,结果显示Sheep1-5之间序列同源性88.8%以上,5个阳性序列与吉林、浙江、黑龙江同源性较高,都在91.6%以上,Sheep1与浙江来源的无形体同源性高达98.2%,与日本,俄罗斯,美国公布的部分序列同源性在91.6%以上,与俄罗斯来源的无形体同源性高达99.2%。(3)无形体病原人工感染绵羊和小白鼠:采用无形体PCR检测为阳性的绵羊血液,制作血涂片,观察病原形态特点。将PCR检测为阳性的绵羊血液通过腹腔接种无形体检测为阴性的绵羊,每隔2天观察实验动物的精神状态,颈静脉采血并通过PCR进行检测,结果在实验第8天检测到实验组B组中有1只绵羊无形体PCR为阳性,但在随后的采血PCR检测中阳性消失;将PCR检测为阳性的绵羊血液通过腹腔接种阴性小白鼠,每隔2天观察小鼠的精神状态,采集小鼠脾脏PCR检测小鼠均未感染无形体,实验第12天后,解剖剩余小鼠发现感染小白鼠脾脏明显肿大。综上所述,新疆地区不同品种绵羊存在无形体病的感染,且感染率比较高;无形体不能通过腹腔接种途径感染绵羊和小鼠,其传播途径可能必须通过媒介蜱进行传播。
【学位单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.26
【部分图文】：