绵羊阴道采集物中早孕因子的筛选

发布时间：2020-10-22 06:33

　　 早孕因子(early pregnancy factor,EPF)是一种与哺乳动物妊娠有关的蛋白,是在哺乳动物受精后最早可在血清中检测出的一种免疫抑制因子和生长因子。研究表明,卵母细胞在受精后产生的一系列反应会使早孕因子产生变化,因此早孕因子可以作为超早孕检测的指标。由于机体在流产之前都会有早孕因子下降的趋势,所以早孕因子在超早孕检测及流产预测和诊断方面有着重要的应用。本试验旨在通过对阴道采集物中早孕因子标记物的筛选与鉴定,选择一种含量稳定且变化有规律的早孕因子对家畜进行超早孕检测。选取身体况相同的80只初产母羊进行同期发情处理,注射氯前列酸钠后48~72h进行试情,随机选取30只发情时间相同的母羊进行配种。在配种后第14~17 d用试情公羊对挑选的母羊进行试情,试情结果为有6只母羊再次发情,将这6只母羊判定为返情母羊,其余24只母羊则为妊娠母羊。将24只妊娠母羊分为两组分别是第Ⅰ组和第Ⅱ组,第Ⅰ组作为返情母羊的对照组,羊只数量应与返情母羊数量一致,因此第Ⅰ组的母羊数量为6只,则第Ⅱ组母羊的数量为剩余的18只。将6只返情母羊分为第Ⅲ组返情组,用来和第Ⅰ组进行早孕因子基因mRNA表达量和孕酮含量的对比试验。对挑选的30只母羊在配种后的第0、5、10、13 d进行样本采集,后在第14 d试情分组。分组后,对第Ⅰ组和第Ⅲ组的母羊在配种后第15、20、25 d进行样本采集,对第Ⅱ组的母羊在配种后第16、19、25 d进行样本采集。根据JAK/STAT信息转导通路和孕酮变化对与其相关的早孕因子进行筛选。采样结束后利用绵羊孕酮(PROG)酶联免疫分析试剂盒将妊娠母羊和返情母羊阴道采集物中不同时期孕酮含量作出对比,利用qPCR方法检测早孕因子相关基因Cox1、Cox2、Jak2、Stat1、Isg15、Mx1、Oas1的mRNA的表达,利用Western Blot检测早孕因子相关基因Cox1、Jak2、Mx1、Isg15的蛋白的表达。结果表明:(1)通过孕酮含量变化与Cox2基因表达量变化的比较发现,在配种15 d前两者间拮抗作用不明显,在配种15 d后两者间拮抗作用明显。(2)IFNτ刺激基因Isg15的表达量对绵羊早孕鉴定有重要意义,可作为早孕诊断检测的指标。上述结果揭示:在所选取的7种与早孕因子相关的基因中,Isg15是最适合做超早孕检测的。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S826
【部分图文】：

3 结果与分析集物中孕酮含量检测结果示，妊娠母羊阴道采集物中孕酮的含量在配种 0 d 时较高，然含量最低，与配种 0 d 相比较减少极显著（p<0.01），随后含 与配种 0 d 相比较仍处于减少状态，减少量极显著（p<0.01），配种 0 d 相比有极显著的增加（p<0.01），随后逐渐减少，在配较减少量显著（p<0.05）。返情母羊阴道采集物中孕酮含量在渐减少，在配种 5 d 含量最低，与配种 0 d 相比较减少极显著渐增多，但配种 10 d 与配种 0 d 相比较仍处于减少状态，减在第 15 d 达到峰值，与配种 0 d 相比有极显著的增加（p<0.配种 20 d 和 25 d 减少量极显著（p<0.01）。

3 结果与分析相关基因表达检测结果 Cox1 的 mRNA 表达结果示，妊娠母羊的阴道采集物中 Cox1 的含量与配种 0 d 相比较量逐渐减少，在配种 5 d、10 d 减少量显著（p<0.05），随后与配种 0 d 相比较在配种 15 d、20 d、25 d 增加量极显著（p<采集物中 Cox1 的含量与配种 0 d 相比较，可得出其含量在配种种 5 d 的含量减少显著（p<0.05），配种 10 d 含量减少极显著（ 开始转变为增加趋势，且在配种 15 d 增加量显著（p<0.05），显著（p<0.01）。通过组间比较可以知道，在整个早孕期间组

沈阳农业大学硕士学位论文子 Cox2 的 mRNA 表达结果所示，妊娠母羊的阴道采集物中 Cox2 的含量与配种 0d 相比较ox2 突然减少，减少量极显著（p<0.01），后逐渐增加，但与减少状态，且减少量极显著（p<0.01）。返情母羊的阴道采集0 d相比较，也得出在配种10 d时Cox2含量减少，且减少量极显加，但与配种 0 d 相比含量仍呈现减少状态，在配种 15 d、20极显著（p<0.01），配种 25 d 与配种 0 d 相比减少量显著（p<较得出，配种 10 d 和 15 d 组间存在差异性，差异性显著（p<0
【参考文献】

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1 程蕾;王定发;刘晓华;向敏;凌明湖;胡修忠;夏瑜;;ISG15和OAS1在奶牛早期妊娠阶段外周血中的表达规律[J];畜牧兽医学报;2015年01期

2 宋立峰;刘静静;刘月琴;张英杰;;早孕因子蛋白基因的克隆及生物信息学分析[J];中国草食动物科学;2014年S1期

3 练玉银;吴晓亮;王家骥;温志锋;聂湘辉;;鼠抗早孕因子单克隆抗体的制备及鉴定[J];中国热带医学;2012年05期

4 徐蕾;;阴超联合血β-HCG比值及孕酮在早期异位妊娠诊断中的价值[J];中国社区医师(医学专业);2010年30期

5 王晓云;姚雯颖;;105例早孕妇女血清孕酮水平与妊娠结局分析[J];中国优生与遗传杂志;2010年01期

6 刘德成;兰凤;;夏洛莱羊非繁殖季节诱导发情和超数排卵试验研究[J];中国畜禽种业;2007年07期

7 刘建斌;李发弟;张英杰;;非繁殖季节羊诱导发情排卵的研究进展[J];甘肃畜牧兽医;2006年06期

8 赵伟,王公金,徐晓波;波尔山羊发情周期和妊娠期外周血浆中孕酮、雌二醇和睾酮的浓度变化[J];江苏农业科学;2004年03期

9 张冬云,王晓华,刘桦;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定早孕因子的等电点[J];中国卫生检验杂志;2001年05期

10 张居农,朱敬芳,王东军,杜国栋,郝国祥,马国兴;甾体避孕药对非繁殖季节母羊诱导发情作用的试验[J];新疆畜牧业;1994年04期

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本文编号：2851232