MCPIP1在LPS和LTA诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤和炎性应答中的作用研究

发布时间：2020-10-24 09:38

　　 由于奶牛自身生理因素或外界条件性病原微生物刺激引发的奶牛乳腺炎,是一种奶牛乳腺综合性疾病,也是导致奶牛养殖业经济损失最为惨重的一种疾病。奶牛乳腺炎严重影响牛奶的质量和产量,并可导致乳腺泌乳机能受损甚至完全丧失。临床上诱发奶牛乳腺炎最为常见的两种细菌为大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。大肠杆菌细胞壁关键组成成分为脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),可诱发机体产生炎症反应;脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)是金黄色葡萄球菌细胞壁的关键组成成分,可导致宿主产生不同的免疫应答。单核细胞趋化蛋白诱导蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-induced protein 1,MCPIP1)作为一种转录因子在机体免疫应答过程中发挥重要作用。然而,MCPIP1是否参与LPS和LTA诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性应答过程尚未见报道。在本实验首先通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测发现MCPIP1在奶牛炎性乳腺组织中基因和蛋白表达水平显著高于奶牛正常乳腺组织。在LPS和LTA分别侵染永生化奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)建立的体外奶牛乳腺炎细胞模型中,MCPIP1基因和蛋白表达水平明显高于未处理的对照组细胞,与乳腺组织中表达结果一致,表明MCPIP1参与奶牛乳腺上皮细胞炎性应答过程。为了进一步研究MCPIP1在LPS和LTA诱导奶牛乳腺上皮细胞免疫应答中发挥作用的机制,本实验通过插入含有MCPIP1序列的慢病毒载体建立稳定过表达MCPIP1的MAC-T细胞,研究MCPIP1对MAC-T细胞在炎症应答过程中细胞炎性因子分泌、细胞增殖、凋亡、DNA损伤和氧化损伤等影响。实验结果显示MCPIP1抑制由LPS和LTA诱导的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8等分泌水平;增强LPS和LTA对MAC-T细胞增殖的抑制作用以及促进LPS和LTA所诱导的氧化损伤和DNA损伤。综上所述,MCPIP1参与LPS和LTA诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤和炎性应答过程,这一研究结果为奶牛乳腺炎病理机制研究提供了新研究思路。
【学位单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.23
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 奶牛乳腺炎研究进展
        1.1.1 奶牛乳腺炎概述
        1.1.2 奶牛乳腺炎发病机理
        1.1.3 奶牛乳腺炎流行与危害
        1.1.4 奶牛乳腺炎治疗
        1.1.5 奶牛乳腺炎预防
    1.2 奶牛乳腺上皮细胞免疫机理
    1.3 奶牛乳腺上皮细胞在乳腺免疫应答中的作用
    1.4 MCPIP1 研究进展
        1.4.1 MCPIP1 生物学特征
        1.4.2 MCPIP1 基因相关功能
        1.4.3 MCPIP1 基因表达调控
        1.4.4 MCPIP1 研究现状
    1.5 研究目的和意义
第二章 MCPIP1在LPS和 LTA诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤和炎性应答中的作用研究
    2.1 材料
        2.1.1 奶牛乳腺组织和奶牛乳腺上皮细胞系
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液配制
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 炎性细胞模型建立
        2.2.4 实时荧光定量PCR
        2.2.5 蛋白免疫印迹技术
        2.2.6单细胞凝胶电泳彗星实验
        2.2.7 超氧化物歧化酶活性检测
        2.2.8 细胞增殖
        2.2.9 质粒转染
        2.2.10 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 MCPIP1 在奶牛乳腺组织和乳腺上皮细胞中的表达水平
        2.3.2 稳定高表达MCPIP1 的奶牛乳腺上皮细胞系建立
        2.3.3 MCPIP1 抑制LPS或 LTA诱导的炎性细胞因子表达
        2.3.4 MCPIP1 促进LPS和 LTA所诱导乳腺上皮细胞的氧化损伤
        2.3.5 MCPIP1 增加LPS和 LTA所诱导乳腺上皮细胞的DNA损伤
        2.3.6 MCPIP1 增强LPS和 LTA对 MAC-T细胞增殖的抑制作用
    2.4 讨论
全文结论
参考文献
致谢
作者简介

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本文编号：2854300