PSF和p54nrb蛋白对PRRSV在MARC-145细胞中增殖的影响

发布时间：2020-10-30 03:45

　　 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是一种影响广泛并且危害严重的猪病病毒,对我国养猪业的正常生产造成了严重的经济损失。因此,对于猪群中的PRRSV的感染情况的了解、发展趋势及防控形势等信息的掌握显得尤为重要。本研究将2015-2017年山东省各地区收集的3526份疑似样品使用PCR方法进行PRRSV抗原检测,同时对收集的12478份血清样品使用ELISA方法进行PRRSV抗体检测,归纳总结该病的发生和流行趋势。检测结果表明,2015-2017年山东省PRRSV抗原阳性率波动较大,PRRSV抗原阳性率分别为40.56%、46.15%、37.24%,且三年内每季度阳性率均在33-50%之间波动;PRRSV抗体一直维持较高水平,阳性率分别为84.39%、86.38%、78.51%,说明山东省猪群的PRRSV疫苗免疫或PRRSV野毒感染十分普遍。通过对山东地区PRRSV感染情况的调查,掌握了该三年内PRRSV的感染情况及变化趋势,显示山东省内的PRRS疫病感染情况平稳的趋势,但仍存在发生疫情的风险,对PRRS的防控具有积极意义。在前期研究中,对PRRSV高致病性毒株感染的MARC-145细胞进行蛋白质组学分析,发现反义通路(antisense pathway)呈显著上调活化,且其中的PSF、p54nrb、Matrin3等antisense pathway关键蛋白呈上调表达。为了探索PSF和p54nrb蛋白对PRRSV在MARC-145细胞的增殖的影响,本研究通过设计PSF、p54nrb和PRRSV N基因的引物,建立荧光定量PCR检测方法,验证了对以上基因的表达量进行定量分析方法的可靠性。通过荧光定量方法可以极大增加检测PSF、p54nrb和PRRSV N基因的准确性和敏感性,提高了PSF、p54nrb和PRRSV N基因的检测水平。为了进一步了解PSF、p54nrb在PRRSV增殖过程中的作用和影响,首先采用RNA干扰技术下调和重组慢病毒技术上调了MARC-145细胞中PSF和p54nrb蛋白表达水平,进而分别检测在上述条件下PRRSV的增殖情况。试验结果表明,MARC-145细胞中PSF和p54nrb蛋白的下调,抑制了PRRSV的增殖,且在以上两种蛋白同时下调表达时增殖作用更加明显;在上调PSF和p54nrb蛋白的各组中,PRRSV的增殖明显高于对照组,且共同上调PSF和p54nrb蛋白对于PRRSV的增加明显。综合分析PSF和p54nrb蛋白的表达对PRRSV的增殖作用的结果,可以说明PSF和p54nrb蛋白的表达有助于PRRSV的增殖,并且在PSF和p54nrb的协同作用下,对PRRSV的增殖作用更加明显。因此,PSF和p54nrb蛋白在PRRSV增殖过程中起到了促进作用,对PSF和p54nrb蛋白的功能研究具有积极意义,对PRRSV的深入研究以及防控提供了参考。
【学位单位】：聊城大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.28
【部分图文】：

图 1 PRRSV SX-1 株（强毒力）感染的 Marc-145 细胞差异表达蛋白的信号网络。上调蛋白以红色显示，下调蛋白以蓝色显示。圆圈大小表示蛋白质与其他蛋白质相互作用的能力，用度数表示。蛋白质的作用程度越大，蛋白质与之相互作用的程度就越大。SFPQ和 NONO分别是 PSF和 p54nrb的同义词。来自 Chen Z、Liu S、Zhang S 等的数据。Fig.1 Signal networks of differentially expressed proteins of MARC-145 cells infected by PRRSV SX-1strain (highly virulent). Upregulated proteins are shown in red, whereas downregulated proteins areshown in blue. Circle sizes represent the capacity of a protein to interact with other proteins, which isquantified in degrees. The greater degree a protein has, the more altered proteins interact with it. SFPQand NONO are the synonyms of PSF and p54nrb, respectively.. Data from Chen Z, Liu S, Zhang S, et al.Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains with higher virulence cause marked proteinprofile changes in MARC-145 cells[J]. Sci Rep, 2018, 8(1): 15000.

标准曲线（图 3-2） PSF 蛋白基因标准曲线斜率-3.6175，轴距为 4方程为 y=-3.6175x+36.87，敏感性为 102，相关系数为 0.999 图 3-1 PSF 荧光定量扩增动力学曲线（copies/μL）Fig. 3-1 Dynamic curve of fluorescence quantitative PCR for PSF

聊城大学硕士学位论文 PSF 蛋白基因荧光定量 PCR 标准曲线的建立过摸索后，使用 20 μL 荧光定量 PCR 体系：使用 SYBR Premix Ex TaqL；PCR Forward Primer (10μM)为 0.4 μM；PCR Reverse Primer (10μM板为 2.0 μL；RNase Free dH2O 为 7.2 μL 将体系混合均匀后，进行荧应条件为：94 ℃，2 min，1 cycle；扩增阶段：94 ℃, 5 s； 60 ℃, 15 s，5 cycle 从荧光定量 PCR 结果可以得到 PSF 蛋白基因的扩增动力学曲及标准曲线（图 3-2） PSF 蛋白基因标准曲线斜率-3.6175，轴距为 4线方程为 y=-3.6175x+36.87，敏感性为 102，相关系数为 0.999
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本文编号：2861937