八种PCV2 VLPs疫苗免疫效果评价比较

发布时间：2020-11-03 12:48

　　 猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD),是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起的一种猪多种疾病综合征的慢性传染病,主要危害断奶仔猪。其因高传染率,低死亡率,可以造成感染机体的免疫抑制等特点,给养猪业带来巨大的经济损失。疫苗免疫是目前控制PCV2感染,防治PCVD的最重要,最有效的手段。目前,市场上商品化疫苗各种各样,安全性与有效性差异较大。因此,如何正确、科学的选择安全高效的猪圆环病毒疫苗,进行有效的猪圆环病毒防控是目前养猪场(户)面临的急需解决的问题。因此,建立科学、合理、简便易行的评价商品化PCV2疫苗安全、效力评价指标体系,并进行不同佐剂的疫苗安全、效力效果比较,对养猪生产上选择安全高效的疫苗和新型疫苗研制具有重要意义。本研究分别选取水性佐剂、蜂胶-VSP复合佐剂、蜂胶-VCG复合佐剂、鲨烷-VCG复合佐剂、免疫增强剂等不同佐剂的8种PCV2 VLPs商品化疫苗与试验疫苗,分别涵盖了杆状病毒表达载体VLP疫苗和大肠杆菌表达VLP疫苗,平行进行昆明小鼠、仔猪的安全性和效力比对评价。通过安全指数(包含内容:相对增重、体温、饮食,精神状态,接种部位等指标)、组织学病理观察等指标评价疫苗的安全性,通过血清PCV2抗体效价,实时荧光RT-PCR方法定量检测组织和外周血淋巴细胞IL-10、IL-17A、IFN-γ的mRNA转录水平,ELISA方法测定外周血中IL-2和IL-4蛋白表达水平,PCV2攻毒保护和组织核酸载量等指标评价疫苗的免疫效力。试验结果显示:本文建立了6个小鼠和仔猪相对应的IFN-γ、IL-17A、IL-10的SYBR GreenⅠRT-PCR检测方法,适用于临床定量检测IFN-γ、IL-17A、IL-10的mRNA表达水平;安全试验比较结果表明:C、E、F组PCV2疫苗在小鼠和仔猪中的安全指数显著高于其它疫苗,其中E组最高;H组的疫苗免疫小鼠后对免疫部位的病变少且对免疫部位肌肉刺激小,其次是A组和F组;效力试验比较结果表明:G组和H组疫苗效力在小鼠和仔猪中均较其它组疫苗高,并且诱导机体产生偏向体液免疫型的免疫应答,其中G组疫苗免疫仔猪后,IFN-γ和IL-17A的mRNA表达量升高,诱导机体产生高于其它各组的特异性免疫。本文成功建立了安全指数,抗体效价,细胞免疫因子,免疫抑制因子,病毒载量“五位一体”的疫苗检验金标准。用该标准比较分析了8种不同佐剂的PCV2疫苗安全性和效力结果表明,丁公司G疫苗和H疫苗免疫效果最好,能显著增强猪群的特异性免疫和非特异性免疫,减少对免疫部位的刺激,具有良好的安全性,该研究为PCV2疫苗的安全性、效力检验和临床推广应用提供了数据支撑。
【学位单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.28
【部分图文】：

山东农业大学硕士专业学位论文表 13 标准质粒浓度及拷贝数Table13 Concentration and copy number belonging of standard plasmid类别Category小鼠 仔猪IL-10 IL-17A IFN-γ IL-10 IL-17A IFN-γ重组质粒浓度（ng/μL） 129.9 207 93.7 97.3 73.5 117.3拷贝数（cop/μL） 3.87×10106.44×10102.89×10102.98×10102.29×10103.78×1010

八种 PCV2 VLPs 疫苗免疫效果评价比较3.1.3 标准曲线的建立3.1.3.1 扩增曲线与标准曲线选取 6 或 8 个梯度稀释的标准品质粒，即 101~106或 108拷贝/μL，进行荧光定量 PCR检测，得到细胞因子的 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 扩增曲线，如图 2 所示，呈“S”型曲线。在 101~106或 108拷贝/μL 时（扩增曲线由左至右分别为 108或 106~101拷贝/μL），细胞因子的 Ct 值与浓度之间有较好的线性关系，且 R2≥0.99，说明相关性良好，可信度较高，如图 3。

标准曲线Fig.3Standardcurveline
【参考文献】

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本文编号：2868592