MDV对鸡Pi3k-Akt信号通路中肿瘤相关因子的影响及复方中药制剂对其的干预作用
发布时间：2020-11-05 16:25
马立克氏病(Marek’s Disease,MD)是易感禽类中高度传染的病毒性肿瘤疾病,是家禽养殖业潜在的威胁,常引起大规模的发病,造成重大的经济损失。虽然有疫苗的防疫,但其的作用具有局限性,MD的防控仍然面临着更多的挑战。在鸡感染马立克病毒(Marek’s disease virus,MDV)后,选择前期研究结果中被富集到Pi3k-Akt信号通路中,且与肿瘤发生相关的差异表达基因,结合MDV感染病程的特点,拟应用复方中药制剂和MD模型鸡,研究MDV感染对鸡Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子Itga2b、Itgb1、Fak、Pik3ca、Pdpk1、Akt1、Mdm2、p53及tert表达的影响,以及复方中药制剂对其干预的作用效果,旨在为防治MDV感染关键靶基因的筛选、中药复方制剂作为饲料添加剂预防MD奠定基础,对家禽养殖业的健康发展具有一定的实践意义。应用qPCR及Western Blot对肿瘤相关因子表达水平,以及改进的TRAP银染法对端粒酶活性进行试验,结果表明:1.对MDV感染鸡脾脏Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子及端粒酶活性的分析结果显示:(1)与对照组相比,鸡感染MDV后,其脾脏组织Pi3k-Akt信号通路中肿瘤相关因子Itgb1、Mdm2、p53在转录水平和蛋白水平均升高,且差异极显著(P0.01);(2)因子Itga2b、Fak转录水平升高,差异显著(P0.05),其蛋白水平呈升高趋势,但差异不显著(P≥0.05);(3)因子Pik3ca、Akt1转录水平升高,差异极显著(P0.01),其蛋白水平升高,差异显著(P0.05);(4)因子Pdpk1在转录水平和蛋白水平差异均呈升高趋势,但差异不显著(P≥0.05);(5)因子Akt1(Ser473)蛋白水平升高,差异显著(P0.05);(6)基因tert转录水平降低,差异显著(P0.05)。(7)与对照组比较,在MDV感染鸡后,其脾脏组织端粒酶活性升高,差异极显著(P0.01)。2.复方中药制剂作用于MD模型鸡后,其脾脏组织Pi3k-Akt信号通路中8个肿瘤相关因子及端粒酶活性的分析结果显示:(1)因子Itga2b在转录水平升高,差异极显著(P0.01),蛋白水平无显著性差异(P≥0.05);(2)因子Itgb1、Fak、Pdpk1转录水平降低,差异极显著(P0.05),其蛋白水平呈降低趋势,差异不显著(P≥0.05);(3)因子Pik3ca、Akt1转录水平降低,差异极显著(P0.01),其蛋白水平降低,差异显著(P0.05);(4)因子Mdm2、p53转录水平和蛋白水平均降低,差异极显著(P0.01);(5)因子Akt1(Ser473)蛋白水平降低,差异显著(P0.05);(6)基因tert转录水平升高,差异不显著(P≥0.05);(7)与对照组比较,端粒酶活性无显著性差异(P≥0.05)。综上所述,在鸡感染MDV后,脾脏组织Pi3k-Akt信号通路肿瘤中相关因子、端粒酶活性均发生一定程度的上调;添加复方中药制剂饲喂MDV感染的鸡后,对鸡脾脏中Pi3k-Akt信号通路中肿瘤相关因子有一定的下调作用。本研究结果将为以该通路相关基因作为靶点筛选中药复方制剂,有效防止MD提供参考依据。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.31
【部分图文】：
先将凝胶置于固定液中固定 10 min；再用凝胶中进行银染 10 min；最后用显影液显色至所需条带出现应中间均需要用去离子水洗 2 次。银染后，扫描凝胶，析成像系统扫描，使用 Image J、SPSS（PASW Statistics）18带灰度值进行统计学分析，计算相对端粒酶活力，结果端粒酶活力＝总条带强度/0.02 amol R5 扩增产物条带强总 RNA 提取结果与分析提取的总 RNA，经超微量核酸蛋白分析仪分析显示，各5 至 2 之间，表明提取的总 RNA 纯度良好。提取各样本 18S 和 5S，3 条带清晰可辩，完整性良好（如图 2）。
3 Pi3k-Akt 信号通路中肿瘤相关因子 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果 products agarose gel electrophoresis results of tumor-associated factors in thsignaling pathway基因条带；2：itgb1 目的基因条带；3：fak 目的基因条带；4：pdpk1 目的基因条带；5：akt1 目的基p53 目的基因条带；8：β-actin 目的基因条带；9：pik3ca 目的基因条带；10：tert 目的基因条带；1rget gene; 2: itgb1 target gene; 3: fak target gene; 4: pdpk1 target gene; 5: akt1 target gene; 6: mdm2 target gene; 8: β-actin target gene; 9: pik3ca target gene; 10: tert target gene; 11: negative control Pi3k-Akt 信号通路中肿瘤相关因子及 tert 转录水平的影响织样品 cDNA 经 qPCR 扩增，分别得到各基因标准曲线、扩增扩增效率良好，且各基因 qPCR 产物只有一个特异峰，无引物标准曲线 R2值在 0.994 至 0.999 之间（详见附录一）。得到各制图表如图 4 和表 3，由图 4、表 3 可知在 MDV 感染鸡后，其通路中肿瘤相关因子 itgb1、fak、pik3ca、akt1、mdm2、p53 转著（P＜0.01）；因子 itga2b 转录水平升高，差异显著（P＜0.
DV 对鸡 Pi3k-Akt 信号通路肿瘤中相关因子及 tert 转录水平影响的结果ffect of MDV on transcription levels of associated factors in tumor of Pi3k-Apathway in chicken (n=3)显著（P＜0.05），“**”表示差异极显著（P＜0.01），无“*”表示差异不显著（P≥0.05），以下各tes significant difference (P＜0.05), “**” indicates extremely significant difference (P＜0.01), and “*” indidifference (P≥0.05)，the following charts are labeled the same.DV 对鸡 Pi3k-Akt 信号通路肿瘤中相关因子及 tert 转录水平影响的结果ffect of MDV on transcription levels of associated factors in tumor of Pi3k-Apathway in chicken (n=3)基因名称Gene Name组别Group对照组Control group试验组Experimental groupitga2b 1 1.32±0.09*
【参考文献】
本文编号：2871887
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.31
【部分图文】：
先将凝胶置于固定液中固定 10 min；再用凝胶中进行银染 10 min；最后用显影液显色至所需条带出现应中间均需要用去离子水洗 2 次。银染后，扫描凝胶，析成像系统扫描，使用 Image J、SPSS（PASW Statistics）18带灰度值进行统计学分析，计算相对端粒酶活力，结果端粒酶活力＝总条带强度/0.02 amol R5 扩增产物条带强总 RNA 提取结果与分析提取的总 RNA，经超微量核酸蛋白分析仪分析显示，各5 至 2 之间，表明提取的总 RNA 纯度良好。提取各样本 18S 和 5S，3 条带清晰可辩，完整性良好（如图 2）。
3 Pi3k-Akt 信号通路中肿瘤相关因子 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果 products agarose gel electrophoresis results of tumor-associated factors in thsignaling pathway基因条带；2：itgb1 目的基因条带；3：fak 目的基因条带；4：pdpk1 目的基因条带；5：akt1 目的基p53 目的基因条带；8：β-actin 目的基因条带；9：pik3ca 目的基因条带；10：tert 目的基因条带；1rget gene; 2: itgb1 target gene; 3: fak target gene; 4: pdpk1 target gene; 5: akt1 target gene; 6: mdm2 target gene; 8: β-actin target gene; 9: pik3ca target gene; 10: tert target gene; 11: negative control Pi3k-Akt 信号通路中肿瘤相关因子及 tert 转录水平的影响织样品 cDNA 经 qPCR 扩增，分别得到各基因标准曲线、扩增扩增效率良好，且各基因 qPCR 产物只有一个特异峰，无引物标准曲线 R2值在 0.994 至 0.999 之间（详见附录一）。得到各制图表如图 4 和表 3，由图 4、表 3 可知在 MDV 感染鸡后，其通路中肿瘤相关因子 itgb1、fak、pik3ca、akt1、mdm2、p53 转著（P＜0.01）；因子 itga2b 转录水平升高，差异显著（P＜0.
DV 对鸡 Pi3k-Akt 信号通路肿瘤中相关因子及 tert 转录水平影响的结果ffect of MDV on transcription levels of associated factors in tumor of Pi3k-Apathway in chicken (n=3)显著（P＜0.05），“**”表示差异极显著（P＜0.01），无“*”表示差异不显著（P≥0.05），以下各tes significant difference (P＜0.05), “**” indicates extremely significant difference (P＜0.01), and “*” indidifference (P≥0.05)，the following charts are labeled the same.DV 对鸡 Pi3k-Akt 信号通路肿瘤中相关因子及 tert 转录水平影响的结果ffect of MDV on transcription levels of associated factors in tumor of Pi3k-Apathway in chicken (n=3)基因名称Gene Name组别Group对照组Control group试验组Experimental groupitga2b 1 1.32±0.09*
【参考文献】
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本文编号：2871887
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