动物疫苗生产细胞株悬浮性和广谱性的研究

发布时间：2020-11-12 05:18

　　 在病毒疫苗的生产过程中,常利用生物反应器大规模培养动物细胞用于病毒繁殖。目前国内细胞株开发水平落后于国外,这阻碍了新疫苗品种的开发和疫苗生产效率的提高。本论文针对动物疫苗生产细胞株开发中的两个关键问题:细胞悬浮培养和细胞对病毒的广谱性。利用RNA-Seq、siRNA和基因过表达载体构建等技术,一方面探索影响细胞悬浮生长的关键基因,另一方面拓展细胞的广谱性,解决细胞对部分病毒不敏感的问题,为将来构建新型全悬浮广谱疫苗生产细胞株打下基础。主要研究成果如下:(1)通过对BHK-21和CHO-K1细胞的转录组分析,筛选出18个贴壁和悬浮细胞之间的显著差异基因,发现其主要与基因转录和翻译相关。使用GeneMANIA构建生物网络确定了18个基因中最关键的基因PABPC1,并发现抑制PABPC1的表达能够促进BHK-21细胞的悬浮生长。(2)构建了犬瘟热病毒受体NECTIN4的真核表达载体并转化牛肾细胞MDBK,获得稳定表达NECTIN4蛋白的细胞株。发现转入病毒受体基因并表达有利于相应病毒感染,能够拓展细胞对病毒的广谱性。
【学位单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S852.52
【部分图文】：

1-1 NECTIN4 蛋白结构示意he structural representation of 入侵方式：细胞内吞、细又可细分为三个亚型：网介导的内吞。从表 1-1 中细胞选择最有效的方式，的受体。白有很多，比如免疫相关的TCP，细胞生长和粘附相关照巴尔的摩分类法分类后的病毒后，例如逆转录病株细胞能够同时表达粘附共 6 个受体，那么这株细细胞株开发所需的费用，

江南大学硕士学位论文别将同源细胞中的 DEGs 和 Sus_muts 二者取交集，得到两个新集合 BHKkeys（图 3-1C）代表在同源细胞间存在显著表达差异同时在悬浮细胞中发基因，将二者取交集，得到 27 个基因，得到集合 Keygenes，剔除在两组因表达变化方向不一致的基因，得到 18 个基因（图 3-1D）。

江南大学硕士学位论文整个调控网络中，基因间共有基因相互作用（Genetic interactions）、蛋calization）、基因共表达（Co-expression）三种关系，统计三种关系共涉到表 3-5，可以看出，PABPC1 与 17 个基因中的 9 个有相互作用，排认为 PABPC1 是最有可能在细胞悬浮生长过程中发挥关键作用的基因
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本文编号：2880302