家禽屠宰场微生物分布特征及大肠杆菌耐药性评估与ERIC-PCR分型研究

发布时间：2020-11-17 15:13

　　 随着抗生素的滥用,作为危害严重食源性致病菌之一的大肠杆菌,其耐药性不断增强,多重耐药谱逐步变宽。肉鸡作为大肠杆菌传播的主要载体,在屠宰加工过程中容易通过食物链传到人体,探究家禽屠宰场加工生产链中大肠杆菌的污染状况,追踪大肠杆菌污染的主要环节显得尤为重要。本研究以浙江省某大型家禽屠宰场为采样点,检测空气沉降微生物的污染指标,评估屠宰场不同区域的微生物污染水平,以分离获得的大肠杆菌为主要研究对象,检测毒力基因并评估其耐药性,通过ERIC-PCR分型探究分离株的亲缘关系。(1)本实验取屠宰场厂房外部和内部空气沉降微生物,检测其污染指标,并通过16S rRNA V3-V4的Illumina高通量测序方法分析其菌群结构多样性。结果显示屠宰后八个车间的菌落总数、肠杆菌科、霉菌和酵母数量均有所增加,宰杀沥血间菌落总数达到最高达到1100 cfu/皿,浸烫脱羽间肠杆菌科数达到最高1500cfu/皿,宰杀沥血间霉菌、酵母数量分别最高达到175 cfu/皿、50cfu/皿。比较屠宰场厂房内外部的空气沉降细菌菌群结构,从门的水平上来看,屠宰场厂内和厂外优势门相同,均为厚壁菌门(Firmicute)、放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)。但从属的水平上屠宰场厂房外和屠宰场厂内优势属几乎都不相同,两者存在不同属类别的细菌污染。屠宰场厂房内空气中主要优势属葡萄球菌属(Staphylococcus),埃希氏菌属(Escherichia),假单胞菌属(Pseudomonas),而屠宰场厂房外空气中主要优势属是芽孢杆菌属(Bacillus),(Phycicoccus),考克氏菌属(Kocuria)。(2)本实验取屠宰场的存在水体,以及用无菌纱布擦拭各区域的地面和器械表面采集微生物进行培养后,通过16S rRNA V3-V4的Illumina高通量测序方法分析其菌群结构多样性,并用PCR对细菌的9大类24种耐药基因进行检测。结果表明,屠宰场不同区域水体、地面和屠宰器械表面微生物均以变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)为主,其相对丰度分别为45.18%~87.74%、0.09%~33.46%、3.34%~28.09%;优势菌属为不动杆菌属(Acinetobacter)、链球菌属(Streptococcus)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)、水栖菌属(Enhydrobacter)、皮生球菌属(Dermacoccus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)、乳球菌属(Tetragenococcus),金黄杆菌属(Chryseobacterium)和弓形杆菌属(Arcobacter),约占总类群40%。各样品中共检测到21种耐药基因,其中sulⅠ、sulⅡ、qnrS、blaTEM和aadA1的检出率为100%,floR、tetA和ereA的检出率为88.9%以上。(3)本实验从收集的屠宰场空气沉降微生物、存在水体、地面、器械表面和冷鲜鸡共240个样品中分离大肠杆菌,检测大肠杆菌的毒力基因并评估其耐药性。结果显示在预冷间的预冷水、外界的干净屠宰用水、包装间和冷藏间的空气中未检出大肠杆菌,但在其他区域均有检测出大肠杆菌。大肠杆菌耐药基因检测结果表明,来源于冷鲜鸡表面ESBL型大肠杆菌检出率最高,对单环β内酰胺类的氨苄西林(62.0%)、磺胺类的复方新诺明(55.4%)耐药最明显,多重耐药菌株多达33株(35.9%),最多耐7种类型的抗生素;除了青霉素类基因(mecC)和多粘菌素类基因(mcr-1)未检出,耐药基因pmrA(92.4%)、blaTEM(78.3%)和qnrS(53.3%)检出率较高。此外,毒力基因检测结果显示肠毒素性大肠杆菌(ETEC)毒力基因est检出率最高,高达31.5%。空气来源的大肠杆菌毒力基因检出率种类最多,检测出stx、est、elt和aggR这四种毒力基因。(4)本实验对分离获得的92株大肠杆菌进行ERIC-PCR分型分析,结果显示在以相似系数0.80的水平上,不同来源的家禽屠宰场大肠杆菌分离株可以分型为11种菌型(A~H),其中E型有32株,为优势菌型,来源包括鸡肛门拭子、挂禽间冷鲜鸡、净膛间挂钩纱布和预冷间空气等不同环节的样品,由此可见同一屠宰场的空气、水体、器械、地面和冷鲜鸡相互之间存在着大肠杆菌的交叉污染。
【学位单位】：中国计量大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S852.6
【部分图文】：

研究技术路线

挂禽间宰杀沥血间浸烫脱羽间净膛间2. 1 材料与方法2.1.1 实验仪器和试剂主要仪器如下表 2-1。表 2. 1 主要仪器Table 2.1 Main equipment仪器名称 生产厂家恒温培养箱、烘箱 上海一恒科学仪器有限公司天平 北京赛多利斯天平有限公司主要试剂：平板计数琼脂（PCA)培养基、孟加拉红培养基、麦康凯培养基均由杭州微生物试剂有限公司提供。2.1.2 样本的采集2.1.2.1 屠宰加工流程

16Figure 2.7 The top 10 phylum (A) and genus (B) of each sample in the external air ofslaughterhouse：BH，屠宰前挂禽间；BS，屠宰前宰杀沥血间；BD，屠宰前浸烫脱羽间；BE，屠宰前；BPr，屠宰前预冷间；BPa，屠宰前包装间；BRe，屠宰前冷藏间；BV，屠宰前内脏间；宰前屠宰场厂房外四周；AH，屠宰后挂禽间；AS，屠宰后宰杀沥血间；AD，屠宰后浸间；AE，屠宰后净膛间；APr，屠宰后预冷间；APa，屠宰后包装间；ARe，屠宰后冷，屠宰后内脏间；AO，屠宰后屠宰场厂房外四周。te:BH，hanging district before slaughter；BS，slitting and blood draining district before slaug，scalding and dehairng district before slaughter；BE，eviscerating district before slaughter；-cooling district before slaughter；BPa，Packing district before slaughter；BRe，Refrigerated dfore slaughter；BV，Visceral district before slaughter；BO，around the factory before slau，hanging district after slaughter；AS，slitting and blood draining district after slaughter；lding and dehairng district after slaughte；AE，eviscerating district after slaughter；APr，Pre-ctrict after slaughter；APa，Packing district after slaughter；ARe，Refrigerated district after slaug，Visceral district after slaughter；AO，outside the factory after slaughter结构
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本文编号：2887650