绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S RPS11基因的克

发布时间：2020-11-23 15:49

　　 本研究以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)新疆流行株基因组DNA为模板,通过PCR扩增30S RPS11基因,对其进行分子特征性分析,并将其抗原表位集中区进行原核表达,分析重组蛋白免疫原性。结果表明,30S RPS11基因全长405bp,编码134个氨基酸,该蛋白是一种受磷酸化调控的蛋白,含有一个核糖体蛋白S11信号。SDSPAGE结果显示,筛选的抗原表位集中区重组蛋白分子质量为29kDa;Western blot分析显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,说明其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明,重组蛋白诱导机体产生的间接血凝抗体效价可达1∶32~1∶64,表明其具有较强的免疫原性。本试验首次证实MO核糖体蛋白(30SRPS11)具有良好的免疫原性和反应原性,为MO血清学诊断及亚单位疫苗研发提供了科学依据。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、菌种及试剂
    1.2 总DNA的提取
    1.3 引物设计与合成
    1.4 MO 30S RPS11基因的PCR扩增、克隆及分子特征分析
    1.5重组表达载体pET-32a （+） -30SRPS11质粒的构建
    1.6 30S RPS11基因的诱导表达及免疫印迹分析
    1.7 30SRPS11重组蛋白的免疫原性研究
2 结果与分析
    2.1 30S RPS11基因PCR扩增与克隆
    2.2 30S RPS11基因及其编码蛋白分子特征分析
    2.3 30SRPS11蛋白二级结构和三级结构的预测
    2.4 重组表达载体pET-32a （+） -30SRPS11的构建与鉴定
    2.5 表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析
    2.6 重组蛋白的小鼠免疫试验
3 讨论

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本文编号：2894753