细胞穿膜肽TAT介导猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9纳米抗体Nb6抗病毒感染的研究

发布时间：2020-12-03 22:08

　　猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）是一种以猪繁殖障碍和呼吸疾病为特征的病毒性传染病,是目前造成全球养猪业巨大经济损失的重要传染病之一。该病由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起。PRRSV以高变性、免疫抑制、持续性感染及抗体依赖性增强为特征,现有疫苗的群体保护力较低,尚无有效的抗病毒药物。PRRSV非结构蛋白Nsp9是RNA依赖的RNA聚合酶,在不同毒株间高度保守,被认为是抗PRRSV药物的一个重要靶标。在先前的研究中,本实验室成功制备出一株PRRSV Nsp9特异性纳米抗体Nb6,并且证明细胞内表达的Nb6可以显著抑制PRRSV在MARC-145细胞中的复制。然而,由于纳米抗体不能有效穿过细胞膜,因此不能进入细胞达到抗病毒的作用。因此,制备安全、有效和无细胞毒性的细胞内递送系统对于提高Nb6的抗病毒活性至关重要。细胞穿透肽（cell penetrating peptides,CPPs）是一类含有约5-30个氨基酸的短肽,可以通过直接易位或内吞作用等方式进入细胞内,且不会引起细胞毒性。目前,CPPs已经被用作向细胞内递送各种货物的工具,例如质粒DNA,siRNA,蛋白质,病毒,成像剂和... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

PRRSV结构图（引自(Dokland,2010;MusicandGagnon,2010)）

第一章 文献综述1996)，Nsp10 是含有锌指基序的解旋酶(Bautista et al., 2002; Seybert et al., 2005; Seybertet al., 2000)，Nsp11 是鸟苷酸特异性核酸内切酶(Nedialkova et al., 2009)。目前对于 pp1ab中其它非结构蛋白（Nsp5-8、Nsp12）的功能及结构都尚不清楚，还需进一步的研究。PRRSV 非结构蛋白 Nsp9 与宿主细胞蛋白共同组装成病毒复制转录复合体（replicationand transcription complex, RTC），参与病毒 RNA 的复制及亚基因组 mRNA 的转录与翻译。同时，Nan 等人发现 PRRSV其它非结构蛋白与 Nsp9 之间发生互作，形成了复杂的互作网络(Nan et al., 2018)，这可能为 RTC 形成和功能的研究提供了理论基础。

人发现了一种由 Gp5 的亚基因组 mRNA 编码的膜锚定蛋白，并证实该 Gp5a 蛋白作为次要结构蛋白被组装到病毒颗粒中，并且在 PRRSV复制中至关重要(Firth et al., 2011;Johnson et al., 2011; Sun et al., 2013)。此外，Kappes 等人研究发现非结构蛋白 Nsp2 能够组装到多种PRRSV毒株的病毒颗粒中，但其在病毒粒子中的作用尚不清楚(Kappes etal., 2013)。1.1.3 PRRSV 感染与机体免疫应答1.1.3.1 PRRSV 感染相关的受体蛋白猪是 PRRSV目前已知的唯一天然宿主，并且 PRRSV感染严格靶向于单核巨噬细胞。PRRSV通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞，内体酸化膜融合之后，病毒基因组被释放到细胞质中，然后开始它的复制。研究表明，PRRSV进入细胞由许多宿主细胞受体或因子介导，包括硫酸乙酰肝素(Delputte et al., 2002)、波形蛋白(Kim et al., 2006)、CD151(Wu et al., 2014)、猪 CD163(Guo et al., 2014)、唾液酸黏附蛋白（CD169）(Delputteet al., 2007)、DC-SIGN（CD209）(Huang et al., 2009; Pineyro et al., 2016)和 M YH9(Gao etal., 2016)等（图 1-3）。通过对猪巨噬细胞 cDNA 文库受体功能的筛选，发现 CD163（清道夫受体半胱氨酸家族成员）是 PRRSV起始感染的关键因素。一些 PRRSV非易感细

【参考文献】：
期刊论文
[1]Porcine reproductive and respiratory syndrome virus vaccines: Immunogenicity, efficacy and safety aspects[J]. Wasin Charerntantanakul.  World Journal of Virology. 2012(01)



本文编号：2896569