三种肝片形吸虫诊断抗原的表达及ELISA诊断方法的建立

发布时间：2020-12-09 04:50

　　肝片形吸虫病（Fascioliasis hepatica）是一种全球性分布的寄生虫疾病。该病是造成反刍动物（如牛羊）发病和死亡的主要原因,季节性发病,对反刍动物危害严重。常规的粪便检查方法只能检出发育成熟的虫体排出的虫卵,不能起到早期诊断的作用,建立早期诊断方法早期准确诊断是有效的控制该病的发生和蔓延的重要手段。因此,本试验成功克隆了肝片形吸虫组织蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸虫谷胱甘肽S转移酶（Fh GST）和肝片形吸虫丝氨酸蛋白酶抑制剂（Fh SPI）基因,并制备成重组蛋白,建立间接ELISA诊断方法,为肝片形吸虫病的有效防治奠定基础。本试验根据GenBank上发表的肝片形吸虫组织蛋白酶L（Fh Cat L）、肝片形吸虫谷胱甘肽S转移酶（Fh GST）和肝片形吸虫丝氨酸蛋白酶（Fh SPI）基因序列,设计合成了引物,提取肝片形吸虫成虫总RNA,通过PCR方法扩增获得目的基因。将获得的目的基因与克隆载体pMD18-T连接,经双酶切、PCR及测序鉴定正确后,将鉴定正确目的片段与表达载体pET-30a连接,经双酶切测序鉴定正确后,用IPTG对目的蛋白进行诱导表达。SDS-PAGE... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

质粒pMD18-T-FhCatL测序结果

图 3-4 质粒 pMD18-T-GST 测序结果Fig 3-4 Plasmid pMD18-T-GST sequencing results粒 pMD18-T-Fh SPI 测序结果的 SPI 基因测序结果与 GenBank 中公布的肝片形吸虫 SPI 基因序列（A44.1）进行比对。结果如图 3-5 显示：氨基酸序列同源性为 99.60%。图 3-5 质粒 pMD18-T-SPI 测序结果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsat L、Fh GST 和 Fh SPI 基因表达载体的鉴定

图 3-5 质粒 pMD18-T-SPI 测序结果Fig 3-5 Plasmid pMD18-T-SPI sequencing resultsL、Fh GST 和 Fh SPI 基因表达载体的鉴定 L、Fh GST 和 Fh SPI 重组表达载体的双酶切鉴定体经 BamHI 和 HindIII 双酶切，结果切出大小为 5000bp 的表达载 和 1200bp 两个目的条带，与预期结果相符，见图 3-6。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]小鼠模型感染大片形吸虫研究平台初探[D]. 全琛宇.广西大学 2015
[2]肝片吸虫保护性抗原基因FH3转基因苜蓿可食疫苗初步研究[D]. 黎万奎.四川大学 2003



本文编号：2906304