大豆抗原蛋白引起猪小肠上皮细胞损伤的机制研究

发布时间：2020-12-09 23:52

　　本试验以猪小肠上皮细胞为模型,进行体外培养试验,进一步探索大豆抗原蛋白引起仔猪肠道致敏损伤的作用机制。用不同浓度（0、1、5、10mg/mL）的大豆球蛋白（11S）和β-伴大豆球蛋白（7S）对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）进行刺激,运用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的变化;采用CCK-8试剂盒检测细胞的存活率;运用蛋白免疫印迹技术（WB）和荧光定量PCR（qRT-PCR）检测MAPKs和NF-κB信号转导通路的相关蛋白表达和相关基因mRNA的表达量。利用ELISA试剂盒检测细胞上清液中5-羟色胺（5-HT）、NO、IL-6、IL-10和二胺氧化酶（DAO）含量。结果显示:1.细胞形态学变化:（i）对照组细胞呈不规则多边形,轮廓清晰且细胞贴壁生长。随着11S或7S浓度的增加,细胞逐渐变圆,轮廓不清晰的细胞逐渐增多,细胞总数量降低,脱落细胞数量逐渐增加;细胞核趋于固缩,核内染色质逐渐浓缩凝集于核膜内侧至消失,凋亡小体出现。（ii）当11S或7S为5mg/mL时,添加PDTC、L-NAME、SP600125和SB202190抑制剂后,光镜下,细胞轮廓变清晰,大部分细胞为不规则多边形,贴... 

【文章来源】：安徽农业大学安徽省

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

1S对细胞生长状态的影响（400×）

图 2-2 7S 对细胞生长状态的影响（400×）Fig. 2-2 Effect of 7S on growth state in IPEC-J2 (400×)注：B1-B8 分别表示 0、1、5、10mg/mL 7S、5mg/mL 7S+PDTC、5mg/mL 7S+L-NAME、5mg/mL 7S+SP600125、5mg/mL 7S+SB202190Note: B1-B8 represent 0、1、5、10mg/mL 7S、5mg/mL 7S+PDTC、5mg/mL 7S+L-NAME、5mg/mL 7S+SP600125、5mg/mL 7S+SB202190,respectively（1）对照组细胞多为不规则多边形，轮廓清晰，贴壁状态良好。当 7S 浓度为1mg/mL 时，细胞总数量开始减少，但有少部分细胞增殖，轮廓不清晰的细胞较少，有少部分细胞脱落。当 7S 浓度为 5mg/mL 时，细胞总数量减少 50%，极少细胞增殖，轮廓不清晰的细胞较多，脱落的细胞较多。当 7S 浓度为 10mg/mL 时，细胞总数量减少近 85%，细胞变圆，脱落的细胞数多。（2）当 7S 浓度为 5mg/mL 时，添加 PDTC、L-NAME、SP600125、SB202190抑制剂组，细胞多呈不规则多边形，极少部分细胞为圆形，轮廓不清晰的细胞较少，细胞总数量较 5mg/mL 组多，有少数细胞增殖，极少数细胞贴壁不完全，脱落细胞极少。

图 2-3 11S 对细胞超微结构的影响Fig. 2-3 Effect of 11S on ultrastructure in IPEC-J2表示 0、1、5、10mg/mL 11S、5mg/mL 11S+PDTC、5mg/mL 11S+L-NAME、5mg/mL 11S+SP600125、5mg/放大倍数：(A1-A8)：5000×； 对细胞超微结构的变化


本文编号：2907685