托佩克猪SLA-1-632-TPK基因的矫正及重组质粒SLA-1-TPK/pMD19-T的构建
发布时间：2020-12-11 08:08
猪白细胞抗原（swine leukocyte antigen,SLA）在猪免疫系统中起递呈抗原作用,对其展开研究可为猪相关传染病的预防提供依据。研究发现,托佩克猪SLA-1-632-TPK基因编码序列发生碱基缺失（距离SLA-1-632-TPK基因5′端632bp处丢失1个碱基"C"）,导致移码突变。为矫正SLA-1-632-TPK基因,设计2对矫正引物,以原重组质粒SLA-1-632-TPK/pMD18-T为模板,利用剪切重叠延伸PCR（splicing overlap extention PCR,SOEPCR）技术分别扩增SLA-1-632-TPK 5′和3′端,之后进行拼接,最后扩增全序列从而矫正目的基因,并进一步连接pMD19-T Simple载体,通过单菌落PCR筛选阳性克隆并测序,并通过GENETYX version 9.0软件对所测序列进行分析。结果显示,SOE-PCR成功扩增得到5′和3′端片段,大小约为650和590bp,与理论设计值大小（648和585bp）接近,经过拼接以后,得到全长约1 200bp,与理论设计值1 223bp接近。菌落PCR结果显示,矫正基因成功...
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2017年06期 第1645-1651页 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接结果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ
中国畜牧兽医４４卷Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′端ＰＣＲ扩增产物；２，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′端ＰＣＲ扩增产物Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，Ｔｈｅ３′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ；２，Ｔｈｅ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ图１ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′和５′端扩增结果Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ３′ｅｎｄａｎｄ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ２．２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′和３′端拼接经拼接和ＰＣＲ扩增后，１．０％琼脂糖凝胶电泳检测到一条约１２００ｂｐ的条带，与理论设计值１２２３ｂｐ大小相符（图２）。图２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接结果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ２．３单菌落ＰＣＲ检测托佩克猪ＳＬＡ－１－ＴＰＫ插入ｐＭＤ１９－ＴＳｉｍｐｌｅ载体经单菌落ＰＣＲ扩增后，１．０％琼脂糖电泳检测到一条约１２００ｂｐ的条带，与理论设计值１２２３ｂｐ相符（图３）。Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１～４，单菌落ＰＣＲ筛选阳性克隆Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１－４，ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲ图３单
６期翟晓鑫等：托佩克猪ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的矫正及重组质粒ＳＬＡ－１－ＴＰＫ／ｐＭＤ１９－Ｔ的构建图４序列分析托佩克猪ＳＬＡ－１－ＴＰＫ基因矫正情况Ｆｉｇ．４ＳｅｑｕｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－ＴＰＫｇｅｎｅｆｒｏｍＴｏＰｉｇｓｐｉｇ１６４９
【参考文献】：
期刊论文
[1]托佩克种猪(约克夏大白猪)的引进与利用[J]. 余文富,王龙钦,付娟林,张似青. 中国猪业. 2016(04)
[2]利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体[J]. 王君,吴芳,柳小玲,梁粟,张培培,章乐,吴江东,曹旭东,张万江. 中国人兽共患病学报. 2016(03)
[3]中国2个地方品系猪SLA-3原核表达载体构建及表达[J]. 苟东洲,戴琳,杨杰,高凤山. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[4]荷包猪SLA-DRa基因的克隆及序列分析[J]. 姜平,高凤山,额尔敦木图. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[5]用改进的重叠延伸PCR技术构建三位点突变载体[J]. 郭紫芬,轩贵平,陈方方,张式一. 生物技术通讯. 2014(02)
[6]猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达[J]. 刘昌华,刘筏,张晶,乔震,高凤山. 中国畜牧兽医. 2013(04)
[7]猪主要组织相容性复合体研究进展[J]. 冯磊,赵德,高凤山. 生命科学. 2012(07)
[8]托佩克猪SLA-2与β2m复合体的构建[J]. 陈兆华,周巧妮,刘昌华,刘腾飞,赵德,高凤山. 动物医学进展. 2011(11)
[9]SLA与免疫抗病的研究进展[J]. 于辉,李彬,李华,颜其贵. 中国畜牧杂志. 2009(05)
[10]单菌落PCR法直接快速鉴定重组克隆[J]. 陈书霞,王晓武,房玉林. 微生物学通报. 2006(03)
硕士论文
[1]巴马小型猪经典SLA-Ⅰ类和Ⅱ类基因克隆及生物信息学分析[D]. 陈佳佳.安徽农业大学 2013
本文编号：2910179
【文章来源】：中国畜牧兽医. 2017年06期 第1645-1651页 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
图２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接结果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ
中国畜牧兽医４４卷Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′端ＰＣＲ扩增产物；２，ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′端ＰＣＲ扩增产物Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１，Ｔｈｅ３′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ；２，Ｔｈｅ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ图１ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因３′和５′端扩增结果Ｆｉｇ．１Ｔｈｅ３′ｅｎｄａｎｄ５′ｅｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅ２．２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因５′和３′端拼接经拼接和ＰＣＲ扩增后，１．０％琼脂糖凝胶电泳检测到一条约１２００ｂｐ的条带，与理论设计值１２２３ｂｐ大小相符（图２）。图２ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的ＰＣＲ拼接结果Ｆｉｇ．２ＴｈｅｓｐｌｉｃｉｎｇＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫｇｅｎｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲ２．３单菌落ＰＣＲ检测托佩克猪ＳＬＡ－１－ＴＰＫ插入ｐＭＤ１９－ＴＳｉｍｐｌｅ载体经单菌落ＰＣＲ扩增后，１．０％琼脂糖电泳检测到一条约１２００ｂｐ的条带，与理论设计值１２２３ｂｐ相符（图３）。Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１～４，单菌落ＰＣＲ筛选阳性克隆Ｍ，ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１－４，ＴｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲ图３单
６期翟晓鑫等：托佩克猪ＳＬＡ－１－６３２－ＴＰＫ基因的矫正及重组质粒ＳＬＡ－１－ＴＰＫ／ｐＭＤ１９－Ｔ的构建图４序列分析托佩克猪ＳＬＡ－１－ＴＰＫ基因矫正情况Ｆｉｇ．４ＳｅｑｕｅｎｃｅｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎｏｆＳＬＡ－１－ＴＰＫｇｅｎｅｆｒｏｍＴｏＰｉｇｓｐｉｇ１６４９
【参考文献】：
期刊论文
[1]托佩克种猪(约克夏大白猪)的引进与利用[J]. 余文富,王龙钦,付娟林,张似青. 中国猪业. 2016(04)
[2]利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体[J]. 王君,吴芳,柳小玲,梁粟,张培培,章乐,吴江东,曹旭东,张万江. 中国人兽共患病学报. 2016(03)
[3]中国2个地方品系猪SLA-3原核表达载体构建及表达[J]. 苟东洲,戴琳,杨杰,高凤山. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[4]荷包猪SLA-DRa基因的克隆及序列分析[J]. 姜平,高凤山,额尔敦木图. 中国畜牧兽医. 2015(02)
[5]用改进的重叠延伸PCR技术构建三位点突变载体[J]. 郭紫芬,轩贵平,陈方方,张式一. 生物技术通讯. 2014(02)
[6]猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达[J]. 刘昌华,刘筏,张晶,乔震,高凤山. 中国畜牧兽医. 2013(04)
[7]猪主要组织相容性复合体研究进展[J]. 冯磊,赵德,高凤山. 生命科学. 2012(07)
[8]托佩克猪SLA-2与β2m复合体的构建[J]. 陈兆华,周巧妮,刘昌华,刘腾飞,赵德,高凤山. 动物医学进展. 2011(11)
[9]SLA与免疫抗病的研究进展[J]. 于辉,李彬,李华,颜其贵. 中国畜牧杂志. 2009(05)
[10]单菌落PCR法直接快速鉴定重组克隆[J]. 陈书霞,王晓武,房玉林. 微生物学通报. 2006(03)
硕士论文
[1]巴马小型猪经典SLA-Ⅰ类和Ⅱ类基因克隆及生物信息学分析[D]. 陈佳佳.安徽农业大学 2013
本文编号：2910179
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