MYOD下游长链非编码RNA的筛选及两个LncRNAs在成肌细胞分化中的功能研究

发布时间：2020-12-20 07:15

　　骨骼肌的分化发育是一个精细的网络调控过程,有多种功能性分子参与其中。Long non-coding RNA（lnc RNA）是一类调控多种生物学功能的非编码RNA,在癌症和肿瘤组织中被广泛的研究。目前针对影响肌肉分化发育的lnc RNA研究已有初步进展,但仍有大量lnc RNA有待挖掘。本研究以高通量芯片技术为主要研究策略,结合差异表达的lncRNA和mRNA,鉴定出两个受Myo D因子调控并影响肌细胞分化的lncRNA,主要研究结果如下:1.利用MyoD特异的siRNA转染C2C12细胞,待细胞分化2天后收集RNA和蛋白质,采用Q-PCR和Western Blotting技术检测敲低效率,同时检测调控上游/下游基因表达,发现MyoG、MyHC表达量随着MyoD基因干扰显著下降,上游基因无变化。利用lncRNA和mRNA芯片筛选了敲低MyoD后差异表达的lncRNA和mRNA,得到642个下调表达和335个上调表达的lncRNA。通过相关性分析,找出与这些差异变化lnc RNA相关的差异mRNA,利用软件对这些mRNA进行GO和KEGG分析,发现这些基因大都富集在与肌肉生成或肌肉运动相... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：140 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

胚胎期骨骼肌分化过程示意图

MYOD 下游长链非编码 RNA的筛选及两个 LncRNAs 在成肌细胞分化中的功能研究最先表达，参与肌细胞增殖，然后MyoD开始表达，诱导细胞周期的退出和细胞分化的开启[21-23]。待细胞进入分化阶段，MyoD启动分化因子MyoG表达，这标志着细胞增殖的彻底结束和细胞分化的全面展开。MyoG可以与MRF4协同作用使细胞进入分化末期并形成肌管，维持肌管融合后肌纤维的稳态[24]。

华中农业大学 2017 届博士研究生学位（毕业）论文2.2.2 调控 DNA 甲基化哺乳动物基因组 CpG 位点的胞嘧啶甲基化很早被人们熟知，这种形式的表观调控与基因沉默和染色质结构的稳定性相关[110-111]。CpG 区域的甲基化由甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B 共同调控 DNMT3L，提升转录因子结合目的基因的亲和力，使基因在不同组织中选择性表达[112]。研究显示，lncRNA 若结合 DNMTs 就能释放出 DNA 甲基化区，如下调 CEBPA 上游的 lncRNA-ecCEBPA，CEBPA DNA 甲基化显著上升[113]。随后的全基因组分析 DNMT1 结合位点，发现其与 lncRNA 结合的区域 DNA 甲基化水平显著降低。类似的结果同样出现在卵母细胞和胚胎中，下调lncRNA 的表达，导致邻近基因 DNA 甲基化升高但表达降低[114]。另外，有研究发现Tcf21 基因反义链转录的 lnc-TARID通过招募甲基转移酶 GADD45A激活 Tcf21 表达，抑制肿瘤发生[115]。


本文编号：2927454