一株鸡源呼肠孤病毒的分离鉴定及防污染RT-LAMP检测法的建立
发布时间：2020-12-22 20:45
禽呼肠孤病毒（avian reovirus,ARV）属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属,可引起鸡的病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾病、肠道疾病、免疫抑制等。导致肉鸡饲料转化率低、增重下降、生长不齐,蛋鸡除跛行外还会引起产蛋量下降、孵化率下降等,增加了养殖成本。自1985年我国首次报道禽呼肠孤病毒感染以来,此后多个省市地区均出现了该病的报道,感染情况日益加重,严重危害养禽业的发展。深化该病的研究对于我国养鸡产业的健康和稳定发展具有积极的意义。本研究从疑似ARV感染的免疫肉鸡体内分离得到一株ARV,对该毒株进行了序列分析及理化性质的研究。同时建立了一种快速可消除携带污染的UDG-RT-LAMP检测方法,并对该方法的反应条件进行了优化,为ARV感染的防控及快速检测提供了理论依据和新思路。本研究分别利用SPF鸡胚和鸡胚肝细胞（CEL）对山东潍坊地区疑似ARV感染的免疫肉鸡关节病料进行了病毒病原的分离,将分离株命名为WF株,对分离毒株进行了序列的测定与分析、毒力的测定、动物回归试验、理化性质的测定等试验。鸡胚和CEL细胞接种病料处理液后出现的特征性病变均与报道相符。分别提取RNA,RT-PCR反应...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LAMP引物模式图（江彦增，2008）
FIP 中的 F2 首先与靶 DNA 的 F2c 互补结合（图2-a），合成互补的 DNA 链（图 2-b）。之后 F3 与靶 DNA 的 F3c 结合（图 2-c），合成一条新的互补 DNA 链，同时 Bst DNA 聚合酶将 FIP 引导合成的 DNA 链置换解离出去（图2-d）。被解离出的 DNA 链 5'的 F1c 和 F1 发生碱基自我互补配对，形成了环状结构（图2-e），BIP 中的 B2 与解离 DNA 链的 B2c 互补结合，此时环状结构被重新打开，合成了新的互补 DNA 链（图 2-f）。同时 B3 从 B1c 段 5'端插入，引导合成了另一条互补 DNA链
挂宰陨砦?０澹??F1 的 3'端开始进行自我引导延伸（图3-h）。同时，FIP 中的 F2 与 F2c 互补结合，合成一条新的互补 DNA 链，并将由 F1 引导自我延伸成的 DNA 单链置换解离出去，并在一端形成环状结构（图 3-i）。之后 B1又启动了自我引导延伸，合成了长度为靶 DNA 两倍的 DNA 链（图 3-j），同时将 FIP 引导合成的 DNA 链置换解离出去，由于其两端存在碱基自我互补配对的区域，于是形成了与结构 h 互补的哑铃结构（图 3-k）
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用[J]. 谢晶,于吉锋,周泷,曹冶,林毅,李兴玉,肖璐,叶勇刚,潘梦,康润敏. 中国畜牧兽医. 2019(02)
[2]LAMP在临床微生物检测中的应用及进展[J]. 郭绮,杨甦庆. 国际检验医学杂志. 2019(01)
[3]鸡病毒性关节炎最新研究进展[J]. 张宁,胡晓悦,韩昱,卢军霞,赵志强,赵博伟. 今日畜牧兽医. 2018(11)
[4]禽呼肠孤病毒纳米PCR检测方法的建立与应用[J]. 郑丽,任卫科,路超,田向学,王利丽,李秀丽,鄢明华. 中国兽医科学. 2018(06)
[5]禽呼肠孤病毒强毒株和弱毒疫苗株感染鸡肝癌细胞的转录组学分析[J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,黄娇玲,谢志勤,范晴,邓显文,罗思思,张艳芳,曾婷婷,王盛,张民秀. 畜牧兽医学报. 2017(11)
[6]鸡病毒性关节炎的研究进展[J]. 王兴和. 中国动物保健. 2016(11)
[7]环介导等温扩增技术的常见问题分析与研究进展[J]. 胡宗悦,须周恒,卢亦愚. 病毒学报. 2016(05)
[8]禽呼肠孤病毒分子生物学诊断方法研究进展[J]. 李天芝,于新友,王金良. 养禽与禽病防治. 2016(07)
[9]LAMP-LFD技术及其在生物快检方面应用[J]. 黄海龙,朱鹏,杨浩. 中国生物工程杂志. 2015(12)
[10]环介导等温扩增技术改进的研究进展[J]. 初亚男,封利颖,张婕妤,邹秉杰,周国华. 微生物学通报. 2015(04)
硕士论文
[1]滑液囊支原体环介导等温扩增技术检测方法的建立与初步应用[D]. 寇艳利.西北农林科技大学 2018
[2]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[3]改良型环介导等温扩增法检测金黄色葡萄球菌的研究[D]. 张涛涛.陕西科技大学 2014
[4]禽呼肠孤病毒和传染性支气管炎病毒的环介导等温扩增检测方法的研究[D]. 马利.山东农业大学 2012
[5]禽呼肠孤病毒检测方法的建立及病毒分离鉴定[D]. 孙美玉.中国农业科学院 2012
[6]非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立[D]. 江彦增.中国农业科学院 2008
[7]禽呼肠孤病毒M组基因的克隆与序列分析[D]. 祁海波.内蒙古农业大学 2008
[8]环介导等温扩增技术检测嗜水气单胞菌方法的建立[D]. 匡燕云.南昌大学 2007
[9]禽（鸡源）呼肠孤病毒的分离与鉴定[D]. 梁英.福建农林大学 2005
本文编号：2932406
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
LAMP引物模式图（江彦增，2008）
FIP 中的 F2 首先与靶 DNA 的 F2c 互补结合（图2-a），合成互补的 DNA 链（图 2-b）。之后 F3 与靶 DNA 的 F3c 结合（图 2-c），合成一条新的互补 DNA 链，同时 Bst DNA 聚合酶将 FIP 引导合成的 DNA 链置换解离出去（图2-d）。被解离出的 DNA 链 5'的 F1c 和 F1 发生碱基自我互补配对，形成了环状结构（图2-e），BIP 中的 B2 与解离 DNA 链的 B2c 互补结合，此时环状结构被重新打开，合成了新的互补 DNA 链（图 2-f）。同时 B3 从 B1c 段 5'端插入，引导合成了另一条互补 DNA链
挂宰陨砦?０澹??F1 的 3'端开始进行自我引导延伸（图3-h）。同时，FIP 中的 F2 与 F2c 互补结合，合成一条新的互补 DNA 链，并将由 F1 引导自我延伸成的 DNA 单链置换解离出去，并在一端形成环状结构（图 3-i）。之后 B1又启动了自我引导延伸，合成了长度为靶 DNA 两倍的 DNA 链（图 3-j），同时将 FIP 引导合成的 DNA 链置换解离出去，由于其两端存在碱基自我互补配对的区域，于是形成了与结构 h 互补的哑铃结构（图 3-k）
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用[J]. 谢晶,于吉锋,周泷,曹冶,林毅,李兴玉,肖璐,叶勇刚,潘梦,康润敏. 中国畜牧兽医. 2019(02)
[2]LAMP在临床微生物检测中的应用及进展[J]. 郭绮,杨甦庆. 国际检验医学杂志. 2019(01)
[3]鸡病毒性关节炎最新研究进展[J]. 张宁,胡晓悦,韩昱,卢军霞,赵志强,赵博伟. 今日畜牧兽医. 2018(11)
[4]禽呼肠孤病毒纳米PCR检测方法的建立与应用[J]. 郑丽,任卫科,路超,田向学,王利丽,李秀丽,鄢明华. 中国兽医科学. 2018(06)
[5]禽呼肠孤病毒强毒株和弱毒疫苗株感染鸡肝癌细胞的转录组学分析[J]. 黄莉,谢芝勋,谢丽基,黄娇玲,谢志勤,范晴,邓显文,罗思思,张艳芳,曾婷婷,王盛,张民秀. 畜牧兽医学报. 2017(11)
[6]鸡病毒性关节炎的研究进展[J]. 王兴和. 中国动物保健. 2016(11)
[7]环介导等温扩增技术的常见问题分析与研究进展[J]. 胡宗悦,须周恒,卢亦愚. 病毒学报. 2016(05)
[8]禽呼肠孤病毒分子生物学诊断方法研究进展[J]. 李天芝,于新友,王金良. 养禽与禽病防治. 2016(07)
[9]LAMP-LFD技术及其在生物快检方面应用[J]. 黄海龙,朱鹏,杨浩. 中国生物工程杂志. 2015(12)
[10]环介导等温扩增技术改进的研究进展[J]. 初亚男,封利颖,张婕妤,邹秉杰,周国华. 微生物学通报. 2015(04)
硕士论文
[1]滑液囊支原体环介导等温扩增技术检测方法的建立与初步应用[D]. 寇艳利.西北农林科技大学 2018
[2]禽呼肠孤病毒流行株的进化及致病性研究[D]. 钟丽.中国农业科学院 2017
[3]改良型环介导等温扩增法检测金黄色葡萄球菌的研究[D]. 张涛涛.陕西科技大学 2014
[4]禽呼肠孤病毒和传染性支气管炎病毒的环介导等温扩增检测方法的研究[D]. 马利.山东农业大学 2012
[5]禽呼肠孤病毒检测方法的建立及病毒分离鉴定[D]. 孙美玉.中国农业科学院 2012
[6]非洲猪瘟病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立[D]. 江彦增.中国农业科学院 2008
[7]禽呼肠孤病毒M组基因的克隆与序列分析[D]. 祁海波.内蒙古农业大学 2008
[8]环介导等温扩增技术检测嗜水气单胞菌方法的建立[D]. 匡燕云.南昌大学 2007
[9]禽（鸡源）呼肠孤病毒的分离与鉴定[D]. 梁英.福建农林大学 2005
本文编号：2932406
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2932406.html
最近更新
教材专著
