牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离及生物学特性研究

发布时间：2020-12-25 03:14

　　分离和鉴定新疆地区BVDV流行毒株,掌握该毒株的生物学特性。在新疆北疆部分地区采集牛病毒性腹泻（BVD）疑似病例的粪便,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、间接免疫荧光抗体检测、免疫电镜观察及血清中和试验五种方法对BVDV进行分离和鉴定。对毒株的TCID50测定,对毒株分别进行抗乙醚、氯仿试验、抗胰蛋白酶试验、耐酸碱性试验、温度敏感性试验及核酸分型试验等理化特性检测。经RT-PCR诊断,病料在预期扩增286 bp处出现了目的片段。将RT-PCR诊断后为阳性的粪便,接种于密度约为80%单层MDBK细胞出现了细胞病变,盲传5代至出现典型的细胞病变。将F5代细胞培养物采用间接免疫荧光抗体检测,结果产生了与C24V标准毒株相同的特异性黄绿色荧光。免疫电镜观察到了大量BVDV粒子,形状呈球形,大小约20-40 nm。血清中和试验中抗体阳性血清处理组细胞均未出现细胞病变,病毒完全被抗体阳性血清中和。根据以上结果确定为BVDV毒株。对BVDV分离株进行毒价和理化特性测定,结果表明该毒株TCID50为10-4.5/0.1 mL,对乙醚和氯仿敏感,对胰蛋白酶敏感,耐碱不耐酸,对温度敏感,经54℃60 m... 

【文章来源】：新疆农业大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

病毒分离结果(100×)

间接免疫荧光抗体检测图 2-3 所示，在激光共聚焦显微镜下，阴性对照没有出现黄绿色荧光，V 标准毒株出现了特异性黄绿色荧光，试验结果成立，待检样出现了和标的特异性黄绿色荧光，说明该样品中存在 BVDV。正常细胞对照 Normal cell controlC24V 阳性对照 C24V positive control

BVDV 形态学鉴定.1 负染电镜观察如图 2-4 所示，经过负染法在电镜下可以看到待测样品中有大小约 40 nm 左，形状为球形，在 C24V 标准株对照组中看到了几个大小约为 70 nm 左右的

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：2936848