绵羊卵巢颗粒细胞miRNA的鉴定和功能研究
发布时间：2020-12-27 10:33
卵泡是哺乳动物卵母细胞发生发育过程中的核心功能单位。颗粒细胞是组成卵泡的重要细胞之一,在卵泡的形成和发育过程中,颗粒细胞与卵母细胞之间的相互作用,会影响卵泡的发育、成熟以及闭锁等生物学过程。利用外源激素处理4-10周龄绵羔羊,可获得比同样处理成年绵羊多10倍左右数量的发育卵泡,以羔羊为供体不仅可以为胚胎体外生产提供大量的卵母细胞资源,大大缩短世代间隔,加快良种扩繁速度。也为人们不断深入探索绵羊卵泡发育提供了良好的实验模型。本研究以中国美利奴（新疆军垦型）成年母羊自然状态下大卵泡（ELF）、小卵泡（ESF）和激素处理后大卵泡（EFF）以及羔羊激素处理前（LSF）、处理后（LFF）的卵巢颗粒细胞（GC）为材料,分别进行了小RNA深度测序、转录组测序以及蛋白质组测序分析。对差异表达miRNA、RNA及蛋白进行联合分析,并在体外培养的绵羊颗粒细胞上对特定miRNA及其预测靶基因进行功能验证。本研究旨在通过对绵羊卵巢颗粒细胞进行多组学联合分析以揭示其潜在分子调控机制,为更好地利用绵羊或羔羊体外胚胎资源,进一步研究绵羊卵泡发育和生殖系统发育及调控提供理论依据和技术支持。主要研究结果如下:1、成年绵...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
幼畜体外胚胎移植(Juvenileinvitroembryotransfer,JIVET)技术流程
图 1-2 卵泡和卵母细胞发育过程（Das andArur., 2017）Fig. 1-2 Stages of follicle and oocyte development and meiotic resumption2.2.2 颗粒细胞转录组和 miRNA 研究进展基因芯片技术和二代测序技术（Next-generation sequencing，NGS）飞速展的同时，也为研究卵泡发育过程中 GCs 的功能和激活途径的研究开辟了新思路。研究人员通过转录组测序技术对 GCs 不同亚型的细胞进行分析，以便挖掘在 GCs 中表达的具有卵母细胞调节功能的特定基因，很多研究都发现一在 GCs 中表达的基因可以作为鉴定卵母细胞质量和发育能力的指标。Munakata 等人利用 RNA-seq 分析了猪卵母细胞-颗粒细胞复合物（OGCs在体内和体外的基因表达，结果显示体内和体外卵泡生长的转录组存在差异，中 HIF1 在 OGCs 发育过程中 mRNA 丰度较高，而 FLT1 （VEGFA 受体）、SP和 PCSK6 基因的低表达可能与体外发育效果较差有关（Munakata et al., 2016）基于基因芯片技术的几项研究报道了一些基因能作为评估卵母细胞质量潜在生物标志物，如透明质酸合成酶 2（HAS2）、抑制素 β- A （INHBA）、皮生长因子受体（EGFR）、gremlin 1（GREM1）、β-细胞蛋白（BTC）、CD4
图 1-3 FSH/PKA/PI3K 通路模型（Knight and Glister., 2006）Fig. 1-3 The model of FSH/PKA/PI3K pathway发育相关 miRNA 研究进展croRNAs （miRNAs）是一类单链、内源性的非编码微小 RNA，广核生物中，一般长度为 18-24 个核苷酸，调控转录后靶基因的表达，、真核生物的各种生理过程包括雌性动物繁殖活动、组织器官及个体发疾病的发生与细胞的分裂增殖及凋亡、各种新陈代谢活动等。93 年，Lee，Feinbaum 和 Ambros 发现秀丽隐杆线虫中的 lin-4 没质，而是产生了一对短 RNA 转录本，每个转录本通过核蛋白质 lin-1制来调节线虫幼虫发育的时间 (Lee et al., 1993)。第二个发现的 miRN线虫发育后期表达，并与 lin-14，lin-28，lin-41，lin-42 和 daf-12 UTR 互补，表明这些基因的表达可以通过 let-7 直接控制。lin-4 和源的并且以类似的方式起作用以触发向晚期幼虫和成虫阶段的rt et al., 2000)。自 let-7 发现以来，已经在病毒，蠕虫和灵长类等多，通过克隆、测序或软件预测等方法鉴定出超过 10,000 种 miRNA(
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53 and NFκB regulate microRNA-34c expression in porcine ovarian granulosa cells[J]. XU Yuan,ZHANG Ai-ling,XIAO Guang,ZHANG Zhe,CHEN Zan-mou,ZHANG Hao,LI Jia-qi. Journal of Integrative Agriculture. 2016(08)
[2]PI3K/AKT信号通路在维持血糖平衡中的作用[J]. 王笑,王甄真,陈雁. 生命科学. 2013(02)
本文编号：2941592
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：114 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
幼畜体外胚胎移植(Juvenileinvitroembryotransfer,JIVET)技术流程
图 1-2 卵泡和卵母细胞发育过程（Das andArur., 2017）Fig. 1-2 Stages of follicle and oocyte development and meiotic resumption2.2.2 颗粒细胞转录组和 miRNA 研究进展基因芯片技术和二代测序技术（Next-generation sequencing，NGS）飞速展的同时，也为研究卵泡发育过程中 GCs 的功能和激活途径的研究开辟了新思路。研究人员通过转录组测序技术对 GCs 不同亚型的细胞进行分析，以便挖掘在 GCs 中表达的具有卵母细胞调节功能的特定基因，很多研究都发现一在 GCs 中表达的基因可以作为鉴定卵母细胞质量和发育能力的指标。Munakata 等人利用 RNA-seq 分析了猪卵母细胞-颗粒细胞复合物（OGCs在体内和体外的基因表达，结果显示体内和体外卵泡生长的转录组存在差异，中 HIF1 在 OGCs 发育过程中 mRNA 丰度较高，而 FLT1 （VEGFA 受体）、SP和 PCSK6 基因的低表达可能与体外发育效果较差有关（Munakata et al., 2016）基于基因芯片技术的几项研究报道了一些基因能作为评估卵母细胞质量潜在生物标志物，如透明质酸合成酶 2（HAS2）、抑制素 β- A （INHBA）、皮生长因子受体（EGFR）、gremlin 1（GREM1）、β-细胞蛋白（BTC）、CD4
图 1-3 FSH/PKA/PI3K 通路模型（Knight and Glister., 2006）Fig. 1-3 The model of FSH/PKA/PI3K pathway发育相关 miRNA 研究进展croRNAs （miRNAs）是一类单链、内源性的非编码微小 RNA，广核生物中，一般长度为 18-24 个核苷酸，调控转录后靶基因的表达，、真核生物的各种生理过程包括雌性动物繁殖活动、组织器官及个体发疾病的发生与细胞的分裂增殖及凋亡、各种新陈代谢活动等。93 年，Lee，Feinbaum 和 Ambros 发现秀丽隐杆线虫中的 lin-4 没质，而是产生了一对短 RNA 转录本，每个转录本通过核蛋白质 lin-1制来调节线虫幼虫发育的时间 (Lee et al., 1993)。第二个发现的 miRN线虫发育后期表达，并与 lin-14，lin-28，lin-41，lin-42 和 daf-12 UTR 互补，表明这些基因的表达可以通过 let-7 直接控制。lin-4 和源的并且以类似的方式起作用以触发向晚期幼虫和成虫阶段的rt et al., 2000)。自 let-7 发现以来，已经在病毒，蠕虫和灵长类等多，通过克隆、测序或软件预测等方法鉴定出超过 10,000 种 miRNA(
【参考文献】：
期刊论文
[1]p53 and NFκB regulate microRNA-34c expression in porcine ovarian granulosa cells[J]. XU Yuan,ZHANG Ai-ling,XIAO Guang,ZHANG Zhe,CHEN Zan-mou,ZHANG Hao,LI Jia-qi. Journal of Integrative Agriculture. 2016(08)
[2]PI3K/AKT信号通路在维持血糖平衡中的作用[J]. 王笑,王甄真,陈雁. 生命科学. 2013(02)
本文编号：2941592
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2941592.html
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