猪瘟病毒反向遗传操作系统的建立

发布时间：2020-12-30 14:20

　　猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一种高度接触性传染病,是危害养猪业的重大传染病之一。自发现以来已流行于世界上多个国家,我国更是深受CSFV侵害的国家之一。目前在中国流行的CSFV毒株与之前的流行株相比,在遗传变异、毒力和致病性等方面都已发生了较大改变,这也使得我国对CSFV的防治面临更严峻的挑战。为了更好的预防与控制CSF,针对CSFV的致病机制,毒力的决定因素等问题仍需进行更深入的探究。随着实验研究的深入和相关学科的发展,反向遗传学技术已经成为研究RNA病毒的重要手段,在CSFV的研究中也发挥着越来越重要的作用。通过构建高效经济的CSFV反向遗传操作系统可以从基因水平上对CSFV有更深入的研究,也可以为CSFV的传统研究提供更多的思路。本研究基于DNA-Launched反向遗传技术,采用RNA聚合酶Ⅱ系统,分别构建了含有CSFV兔化弱毒疫苗株及强毒石门株全长基因组序列的感染性克隆。通过在CSFV基因组的5’端引入巨细胞病毒（CMV）启动子,3’端引入丁型肝炎病毒（HDV）核... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
文献综述
    第一章 猪瘟病毒及其反向遗传系统的研究进展
        1.1 猪瘟病毒概述
            1.1.1 猪瘟病毒的分类学与形态学
            1.1.2 猪瘟的流行与分布
            1.1.3 猪瘟的临床症状和病理变化
            1.1.4 猪瘟的诊断方法
            1.1.5 猪瘟的防控措施及展望
        1.2 反向遗传系统在猪瘟病毒研究中的应用
            1.2.1 RNA病毒反向遗传学概述
            1.2.2 猪瘟病毒反向遗传系统的背景与操作
            1.2.3 猪瘟病毒反向遗传系统的应用及展望
试验研究
    第二章 猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立及其初步应用
        2.1 材料和方法
            2.1.1 细胞、病毒与质粒
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器设备
            2.1.4 构建CSFV C株感染性克隆的主要引物
            2.1.5 CSFV C株感染性克隆的构建策略
            2.1.6 感染性克隆的转染及病毒拯救
            2.1.7 拯救病毒的初步RT-PCR鉴定
            2.1.8 拯救病毒分子标签的鉴定
            2.1.9 拯救病毒的序列分析
            2.1.10 间接免疫荧光（IFA）鉴定
            2.1.11 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测
            2.1.12 Western blot鉴定
            2.1.13 病毒生长曲线的建立
            2.1.14 表达EGFP的重组猪瘟兔化弱毒疫苗株的构建
        2.2 结果
            2.2.1 CSFV C株感染性克隆的构建
            2.2.2 CSFV C株拯救病毒的初步鉴定
            2.2.3 CSFV C株拯救病毒的序列分析
            2.2.4 CSFV C株拯救病毒生物学特性的验证
            2.2.5 CSFV C株拯救病毒一步生长曲线的建立
            2.2.6 含有EGFP基因的CSFV C株感染性克隆质粒的构建
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 猪瘟病毒石门株反向遗传操作系统的建立
        3.1 材料和方法
            3.1.1 细胞、病毒与质粒
            3.1.2 主要试剂与仪器设备
            3.1.3 构建CSFV石门株感染性克隆的主要引物
            3.1.4 CSFV石门株感染性克隆的构建策略
            3.1.5 感染性克隆的转染及病毒拯救
            3.1.6 拯救病毒的初步RT-PCR鉴定与分子标签的鉴定
            3.1.7 拯救病毒的序列分析
            3.1.8 拯救病毒的生物学特性分析
            3.1.9 病毒生长曲线的建立
        3.2 结果
            3.2.1 CSFV石门株感染性克隆的构建
            3.2.2 CSFV石门株拯救病毒的初步鉴定
            3.2.3 CSFV石门株拯救病毒的序列分析
            3.2.4 CSFV石门株拯救病毒生物学特性的验证
            3.2.5 CSFV石门株拯救病毒一步生长曲线的建立
        3.3 讨论
        3.4 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪圆环病毒病并发非典型性猪瘟病例的诊断[J]. 陈同煜,于涛,刘思当,秦四海.  黑龙江畜牧兽医. 2017(20)
[2]云南省2013—2015年间部分猪场猪瘟感染情况调查[J]. 彭洁,高洪,严玉霖,张自芳,胡媛媛.  黑龙江畜牧兽医. 2017(02)
[3]2013-2014年广西省主要猪病毒性传染病流行病学调查[J]. 胡帅,周庆安,李军,林敏玲,钟舒红,潘艳,陈泽祥,杨威,许力干.  中国畜牧兽医. 2016(06)
[4]猪瘟国内外流行情况概述[J]. 栾培贤,肖建华,赵靓,王洪斌.  东北农业大学学报. 2013(09)
[5]反向遗传学技术在猪瘟病毒研究中的应用[J]. 刘大飞,孙元,仇华吉.  生物工程学报. 2009(10)
[6]猪瘟兔化弱毒疫苗——半个世纪的回顾[J]. 仇华吉,童光志,沈荣显.  中国农业科学. 2005(08)
[7]传染性法氏囊病病毒感染性克隆的快速构建[J]. 黄耀伟,李龙,李建荣,于涟.  生物化学与生物物理学报. 2003(04)

博士论文
[1]Rab1A和Rab5对猪瘟病毒增殖的影响及机制[D]. 林吉辉.西北农林科技大学 2017



本文编号：2947790