PRRSV GP5蛋白的高效表达及抗体检测iELISA方法的建立

发布时间：2021-01-05 09:12

　　猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗称“猪蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV）引起的一种具有高发病率和死亡率的接触性传染病。PRRSV共有两种基因型：欧洲型（Ⅰ型，LV株）和美洲型（Ⅱ型，VR2332株）；而我国流行的PRRSV以美洲型为主。研究证明，PRRSV GP5蛋白是由ORF5基因编码的病毒的高度糖基化的囊膜蛋白，全长200个氨基酸，含有多个中和性抗原表位，具有诱导机体产生中和性抗体的能力，被认为是研制基因工程疫苗和亚单位疫苗的良好靶蛋白，成为PRRSV的研究热点。但目前国内尚无针对GP5蛋白抗体检测的商品化ELISA试剂盒，无法检测免疫机体内GP5蛋白的抗体水平，不能对免疫后中和性抗体的水平进行有效评价。为解决这一难题，开展了本项研究。为获得重组GP5蛋白的高效表达，本研究利用RT-PCR技术从PRRSV SD-JN株（美洲型）的病毒基因组RNA中扩增编码GP5蛋白的... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PRRSV膜蛋白的拓扑结构图

法RRSV 毒株5 细胞和高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（HP-PRRSV）SD学院动物疫病防治与繁育重点实验室保存。体杆菌 DH5α 为山东省农业科学院动物疫病防治与繁育重点实验室 BL21(DE3) pLysS 购自 TransGen 公司pMD19-T Vector 购自 TaKaRa 公司；载体的物理图谱如图 2 所示：

图 3 pET-32a(+)原核表达载体物理图谱e physical map of pET-32a (+) prokaryotic expression隆腹水抗体为中国农业科学院上海兽医研究所童鼠 IgG（H+L）抗体和 HRP 标记的山羊抗猪 I性血清采自健康猪， 经 IDEXX 公司抗体检测环病毒（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂血清由本实验室制备并保存。转录酶 Prime ScriptTMOne Step RT-PCR Kit，DL限公司。DNATaq 聚合酶、T4 DNA 连接酶、

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析[D]. 高志强.中国农业大学 2003



本文编号：2958406