CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除

发布时间：2021-01-05 15:03

　　本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP（chr2,Expression In PGC）基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2016,47(06)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 试验材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 C2EIP基因克隆与靶位点选择
        1.2.2 cas9/gRNA表达载体构建
        1.2.3 DF-1细胞培养与转染
        1.2.4 Luciferase-SSA报告载体活性检测
        1.2.5 T7E1酶切试验
        1.2.6 TA克隆测序分析
2 结果
    2.1 C2EIP基因克隆与cas9/gRNA表达载体构建
    2.2 Luciferase-SSA报告载体法检测cas9/gRNA载体基因敲除活性
    2.3 T7E1酶切检测靶向C2EIP cas9/gRNA3的活性
    2.4 TA克隆测序分析cas9/gRNA3基因敲除效率
3 讨论



本文编号：2958871